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Quick and Easy TRAFO Protocol
蚂蚁淘
/发布时间:1632245407 /浏览量:479
Whenjustafewtransformantsaresufficient,suchasthetransformationofatestplasmidoraGAL4BDfusionplasmid,thefollowingprotocolcanbeused.ThisprocedureisveryflexIBLeandcanbeappliedtoyeastcellsfromanumberofdifferentsources;however,forbestresults,usecellsfromafreshlygrownplate. RapidTransformationProtocol
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Day11.Inoculatetheyeaststrainina2cm2patchontoYPADagar(YPD12supplementedwith100mgadeninehemisulphateperliter)andincubateovernightat30C.Alternatively,theyeaststraincanbeinoculatedinto5mlofliquidmedium(2xYPADorSCselectionmediumandincubatedonashakerat30Cand200rpm.
Day21.HeatatubeofcarrierDNAinaboilingwaterbathfor5minandthenchillinice/water.2.Scrapea50mlblobofyeastfromtheYPADplateandsUSPendthecellsin1mlofsterilewaterina1.5mlmicrocentrifugetube.Thesuspensionwillcontainabout5x108cells.Cellsgrownovernightin2xYPADbrothwillreachatiterbetween1and2x108/ml;thetiterinSCmediumwillbeabout5x107/ml.Harvest2mlofaYPADcultureand5mlofaSCculture.Note:cellsinlogphasegrowthonagarorinliquidmediumwilltransformwithhighefficiency.3.Pelletthecellsattopspeedinamicrocentrifugefor30secanddiscardthesupernatant.4.*AddthefollowingcomponentsoftheTransformationMixtothecellpelletintheorderlisted:1.PEG350050%w/v 2.LiAc1.0M 3.BoiledSS-CarrierDNA(2mg/ml) 4.PlasmidDNA(0.1to1µg)pluswater TotalVolume
