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ThisProtocolallowsforTRAFOwithanyYeastcellsource

Referenece;Gietz,R.D.andR.A.Woods.(2002)TRANSFORMATIONOFYEASTBYTHELiac/SSCARRIERDNA/PEGMETHOD.MethodsinEnzymology350:87-96.

Whenjustafewtransformantsaresufficient,suchasthetransformationofatestplasmidoraGAL4BDfusionplasmid,thefollowingprotocolcanbeused.ThisprocedureisveryflexIBLeandcanbeappliedtoyeastcellsfromanumberofdifferentsources;however,forbestresults,usecellsfromafreshlygrownplate.

AllsolutionsusedinthisprotocolaredescribedintheTRAFOSolutionsPage

RapidTransformationProtocol

Day11.Inoculatetheyeaststrainina2cm2patchontoYPADagar(YPD12supplementedwith100mgadeninehemisulphateperliter)andincubateovernightat30C.Alternatively,theyeaststraincanbeinoculatedinto5mlofliquidmedium(2xYPADorSCselectionmediumandincubatedonashakerat30Cand200rpm.
Day21.HeatatubeofcarrierDNAinaboilingwaterbathfor5minandthenchillinice/water.2.Scrapea50mlblobofyeastfromtheYPADplateandsUSPendthecellsin1mlofsterilewaterina1.5mlmicrocentrifugetube.Thesuspensionwillcontainabout5x10⁸cells.Cellsgrownovernightin2xYPADbrothwillreachatiterbetween1and2x10⁸/ml;thetiterinSCmediumwillbeabout5x10⁷/ml.Harvest2mlofaYPADcultureand5mlofaSCculture.Note:cellsinlogphasegrowthonagarorinliquidmediumwilltransformwithhighefficiency.3.Pelletthecellsattopspeedinamicrocentrifugefor30secanddiscardthesupernatant.4.*AddthefollowingcomponentsoftheTransformationMixtothecellpelletintheorderlisted:
Component
Volume(µl)
1.PEG350050%w/v
240µl
2.LiAc1.0M
36µl
3.BoiledSS-CarrierDNA(2mg/ml)
50µl
4.PlasmidDNA(0.1to1µg)pluswater
34µl
TotalVolume
360µlBesuretovortexmixthecarrierDNAbeforepipettingit.5.Incubatethetubeinawaterbathat42°Cfor40to60min.Manylaboratorystrainswillyieldupto1x10⁵transformants/mgplasmidafter60minincubation.Extendingthetimeat42°Cto180minincreasestheyieldto>1x10⁶/µgwithsomestrains.6.Microcentrifugeattopspeedfor30secandremovetheTransformationMixwithamicropipettor.7.Pipette1.0mlofsterilewaterintothetubeandresuspendthecellsbystirringwithamicropipettetipandthenvortexmixingvigorously.8.Pipette10and100µlsamplesontoplatesofappropriateSCselectionmedium,incubateat30°Cfor3-4daysandisolatetransformants.The10µlsamplesshouldbepipettedinto100µlpuddlesofsterilewater.Thisprotocolcanbeusedwithculturesthathavebeenstoredatroomtemperatureorinarefrigerator.Theyieldwillbereducedwitholderculturesbutwillgenerallybesufficienttoisolateanumberoftransformantsofthedesiredgenotype.

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Component	Volume(µl)
1.PEG350050%w/v	240µl
2.LiAc1.0M	36µl
3.BoiledSS-CarrierDNA(2mg/ml)	50µl
4.PlasmidDNA(0.1to1µg)pluswater	34µl
TotalVolume	360µlBesuretovortexmixthecarrierDNAbeforepipettingit.5.Incubatethetubeinawaterbathat42°Cfor40to60min.Manylaboratorystrainswillyieldupto1x10⁵transformants/mgplasmidafter60minincubation.Extendingthetimeat42°Cto180minincreasestheyieldto>1x10⁶/µgwithsomestrains.6.Microcentrifugeattopspeedfor30secandremovetheTransformationMixwithamicropipettor.7.Pipette1.0mlofsterilewaterintothetubeandresuspendthecellsbystirringwithamicropipettetipandthenvortexmixingvigorously.8.Pipette10and100µlsamplesontoplatesofappropriateSCselectionmedium,incubateat30°Cfor3-4daysandisolatetransformants.The10µlsamplesshouldbepipettedinto100µlpuddlesofsterilewater.Thisprotocolcanbeusedwithculturesthathavebeenstoredatroomtemperatureorinarefrigerator.Theyieldwillbereducedwitholderculturesbutwillgenerallybesufficienttoisolateanumberoftransformantsofthedesiredgenotype. ================ 蚂蚁淘在线 ================ 免责声明：本文仅代表作者个人观点，与本网无关。其创作性以及文中陈述文字和内容未经本站证实，对本文以及其中全部或者部分内容、文字的真实性、完整性、及时性本站不做任何保证或承诺，请读者仅作参考，并请自行核实相关内容版权声明：未经蚂蚁淘在线授权不得转载、摘编或利用其他方式使用上述作品。已经经本网授权使用作品的，应该授权范围内使用，并注明“来源：蚂蚁淘在线”。违反上述声明者，本网将追究其相关法律责任。相关阅读 PCR常见问题分析及对策实验方法影响细胞转染效率的因素 assaybiotech抗体系列清单,部... analytical\|产品目录\|代理商\|... 南方印迹法(southern blot)... 标准植物分子生物学protocol(五)... \"alum\"是什... CambridgeC. \| CFC中文网 ...begins to step in... βgalactosidase \| The... 人白介素4(IL4)ELISA试剂盒说明... 刘明耀、李大力等采用CRISPR纠正血友... 资质认证获得国家资质，权威认证！全国联保全国联保，官方无忧售后正规发票正规发票，放心购买签订合同签订合同，保障您的权益购物指南购物流程注册登录账户管理订单查看常见问题 FAQS 蚁豆兑换物流说明评论规则发票说明价格说明支付说明服务协议版权声明诚信保障免责申明销售协议隐私条款法律申明售后服务退换货政策工作时间退款说明售后支持售后申请表模板列表关于我们公司简介联系我们资质证书人才招聘商务合作万众创业网址导航蚂蚁淘商城科研狗苏州蚂蚁淘生物信息网现货促销微信公众号 Cyanagen产品 \| 转染试剂24765 \| Pluriselect公司 \| ProChimia HS-C6-EG3 \| bluecal-ingredients华 \| Haemtech进口试剂 \| Stemgent代理 \| 蚂蚁淘 \| 检验耗材 copyright©2005-2021 蚂蚁淘在线版权所有　苏州蚂蚁淘生物科技有限公司 www.assay-online.com ICP号：苏ICP备17049038号-16 /**/

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