簇生成和测序试剂

Yeast Chromosomal DNA Prep

YeastChromosomalDNAPrep

  • use25mlcellspertimepoint/sample
  • addcellsto25ml100%Ethanol(at-20°C),add1ml0.5MEDTA
  • storeat-20°C
  • thawcells,washoncewithH2O,resUSPendin0.5mlShperoplastbuffer
  • incubatefor30minat37°C
  • add0.5mlProteinaseKbuffer
  • incubatefor30minat65°C
  • add0.2ml5MKAc,incubateonicefor10min
  • spinat10,000rpmfor15min
  • takesupernatantandEthanolprecipitatetheDNA
  • resuspendDNAin500µlTE
  • RNaseIdigestfor30minat37°C
  • extractwithPhenol/Chloroform
  • EthanolprecipitateDNA
  • dissolveDNAinTEandmeasureconcentration
  • use2-5µgforSouthernblot


Buffers:Shperoplastbuffer:1.2Msorbitol;0.1MEDTA;1%b-Mercaptoethanol;0.1%Zymolyase.[for10ml:6ml2Msorbitol;2ml0.5MEDTA;100µlb-Mercaptoethanol;10mgZymolyase]42°CProteinaseKbuffer:50mMEDTA;0.3%SDS;0.01%proteinaseK.[for10ml:1ml0.5MEDTA;300µl10%SDS;1mgproteinaseK]

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