寡聚核酸

"Smash and Grab" Recovery of Plasmids

SmashandGrab

DavidAmberg

  1. Growcellsin3mlsselectivemediao/n.
  2. Pelletcellsby2quickspinsinamicrofuge.
  3. ResUSPendcellsin200ulofthefollowingsoln:
    • 5mlSCE
    • 60ul10mg/ml100TZymolyase
    • 10ul2-ME
  4. Vortexandincat37¡Cfor30-60min.
  5. Add400ul0.2NNaOH/1%SDS,inverttomixandinc.onicefor5min.
  6. Add300ul3MK/5MOAcpH4.5,inverttomixandinconicex5min.
  7. Spin2mininmicrofuge,poursuperintoafreshtubeandrepeatspin.Remove500ultoafreshtube.
  8. Add300uliPrOH,vortexandletstandfor5min.atRT.
  9. PelletDNA5mininamicrofuge,thenwashpelletwith70%EtOHandrepeatspin.
  10. Drypelletinspeedvacandreconin25ulTE.
  11. Porate2ulintoelectrocompetentcoli,recoverandplateall.
  • SCE:
  • 1MSorbitol
  • 0.1MSodiumCitratepH7.6
  • 0.06MEDTA

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