一、实验原理

细胞划痕（

woundhealing

）法是简捷测定细胞迁移运动和修复能力的方法，类

似体外伤口愈合模型，

在体外培养皿或平板培养的单层贴壁细胞上，

用微量枪头

或其它硬物在细胞生长的中央区域划线，

去除中央部分的细胞，

然后继续培养细

胞至实验设定的时间，

取出细胞培养板，

观察周边细胞的生长迁移能力，

实验通

常需设定正常对照组和实验组，

实验组是加了某种处理因素或药物、

外源性基因

等的组别，

通过不同分组之间的细胞对于划痕区修复能力的不同，

可以判断各组

细胞的迁移与修复能力。

二、实验步骤

1

、

所有要灭菌，直尺和

marker

笔在操作前紫外照射

30min

。

2

、

1

）先用

marker

笔在

6

孔板背后，用直尺比着，大约每隔

0.5-1cm

一道，横

穿过孔，每孔至少穿过

5

条线。

2

）在空中加入约

5×10

5

个细胞（具体数量因细胞不同而不同，掌握为过夜

能铺满）

，

37

℃培养箱培养。

3

）第二天用

10µl

枪头比着直尺，与标记线垂直的方向划两条平行线，枪头

要垂直，不能倾斜。

4

）用

PBS

洗细胞

3

次，去除划下的细胞，加入无血清培养基。

5

）放入

37

℃

5%CO

2

培养箱，按

0

、

6

、

12

、

24h

倒置显微镜观察，拍照。

三、注意事项

1

、在用

PBS

缓冲液冲洗时，注意贴壁慢慢加入，以免冲散单层贴壁细胞，影响

实验拍照结果。

2

、一般做划痕实验，都是无血清或者低血清（

2%

）

，否则细胞增殖就不能忽略。

（也可用丝裂酶处理一小时）

3

、按照

6

孔板背后画线的垂直方向划痕，可以形成若干交叉点，作为固定的检

测点，以解决了前后观察时位置不固定的问题。