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各位大神，我现在用PET28α作为表达载体，在连接的时候是不是载体要进行双酶切、胶回收?我双酶切的目的片段和PET28α连接后，导入感受态中没有成功，不知道怎么回事，请教各位。
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回复：时间：2017-07-27
How big is the insert? How many base pairs are there between the two restriction enzyme sites on the pET28a?
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回复：时间：2017-07-20
mparkHowbigistheinsert?HowmanybasepairsaretherebetweenthetworestrictionenzymesitesonthepET28a?插曲片段是825bp,pET28a两个酶切位点之间大概是30个bp。谢谢
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回复：时间：2017-07-28
IftheinsaertDNAisgeneratedfromPCR,trytomakebluntendingthengelpurificationoftheblunt-ended825bpPCRproduct.makebluntendligationofthe825bpfragmentonsomesubclonevector,suchpUC19first.Screeningsubclonesandsequencingthepositiveone.CutofftheinsertDNAandthencloneitintopET28a.
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回复：时间：2017-07-29
展开引用mparkIftheinsaertDNAisgeneratedfromPCR,trytomakebluntendingthengelpurificationoftheblunt-ended825bpPCRproduct.makebluntendligationofthe825bpfragmentonsomesubclonevector,suchpUC19first.Screeningsubclonesandsequencingthepositiveone.CutofftheinsertDNAandthencloneitintopET28a.......好的，谢谢你
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非常满意 
