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Materials
| MiliporefiltertypeHA0.45micron |
| Cultureplates(Linbromodel76-033-05) |
| ProteininDDWorHEPESbuffer(10mg/mL) |
| Vacuumgrease |
| Syringewith18Gneedle |
Procedure
| 1. | Milliporefilterallsolutionstobeused. |
| 2. | Dialyzeproteinfor24hoursagainstwater,ifpossIBLe.Otherwise,includeminimumrequirementsforkeepingtheproteinsoluble.IfbufferisnecessaryuseHEPESbuffer. |
| 3. | Fortheinitialscreeningusethebuffersandprecipitantsrecommendedinthefastcrystalscreen(Jancarik,J.&Kim,S.H.1991J.Appl.Cryst.24,409),asinstructed,andthehangingdropmethodwiththeLinbrotissuecultureplatesthathave24wells,1.7cmdiameter,1.6cmdeep.Seediagram. |
| 4. | Useaproteinsolutionwithastartingconcentrationof10mg/mL.Thisconcentrationmayhavetobeadjusteddependingonthenumberofthedropsthatprecipitate.Theconcentrationisaboutcorrectwhenone-thirdtoone-halfofthedropsdevelopprecipitatewithinoneweek. |
| 5. | Deposit0.7mLofreservoirsolutionintothewell.Combine2microlitersoftheproteinsolutionand2microlitersofthereservoirsolutiontomakeuptheproteindroplet. |
| 6. | Incubateoneatroomtemperatureandoneatcold(4-10°C)temperature. |
Notes
| 1. | CrstallizationscreeningkitsandothersuppliesareavailablefromHamptonresearch. |
TakenfrommethodsbyJ.JancarikandS.H.Kim
IfyouusemethodsfromtheKinesinsite,weaskthatyoucitetheKinesinHomePageandauthors,ortheappropriatesourcepublicationinyourwork.
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