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2007-04-07【求助】透析缓冲液的选择问题

jun1874
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我有一蛋白,此蛋白共经过两次纯化,第一次凝胶层析,用的是20mmHCl作为洗脱液,第二次纯化用离子交换,初期洗脱液为20mmNaAc(pH6.0),后用含1.5MNaCl的20mmNaAc(pH6.0)梯度洗脱.现欲对其进行脱盐,想选择透析的方法,不知透析液该用哪个呢?考虑到HCl具挥发性,如用20mMHCl冻干后似可以完全脱盐,且第一次纯化时也用此缓冲液洗脱,应对蛋白活性没有太大影响,不知是否可以选择其作为透析的缓冲液呢?还是应选择pH为6.0的PBS作为缓冲液呢?
望达人告知啊~~~
3Q~~~
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回复：时间：2007-04-15

应该选择离子强度和离子种类与原有缓冲液差不多的缓冲液透析外液与内液差别越小越不会有问题。可以配置几种缓冲液。然后盐浓度从高到低透析。至于酸碱性最好还是用NaAc，至于ph可以逐渐调到你需要的地方。这都来自于一个理论。就是相变。越相似越不会有相变。是一个教授说得。我都记在心里的。纯化时候也很有用。

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回复：时间：2007-04-17

展开引用yager2500应该选择离子强度和离子种类与原有缓冲液差不多的缓冲液透析外液与内液差别越小越不会有问题。可以配置几种缓冲液。然后盐浓度从高到低透析。至于酸碱性最好还是用NaAc，至于ph可以逐渐调到你需要的地方。这都来自于一个理论。就是相变。越相似越不会有相变。是一个教授说得。我都记在心里的。纯化时候也很有用。......非常感谢!我去试试!

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