以下是我最近在分离枯否细胞时得出的一点个人经验，仅供大家交流：1，严格的无菌原则2，充分的麻醉效果3，开腹前腹腔注射肝素形成全身肝素化4，插管前先将前灌流液及IV型胶原酶预热37度5，先分离门静脉,肝动脉及下腔V，结扎肝A，在门静脉下穿两根线6，门静脉插管双重结扎，以防分离肝脏时硅胶管脱落7，插管成功后，剪断下腔静脉放血，肝脏在体灌注前灌流液20ML/MIN,20MIN8,肝脏变白后，小心将肝脏游离出腹腔，置无菌瓶皿中，改用IV型胶原酶液灌洗0.05％30ML，反复灌洗20MIN,可见肝脏变软，胞膜分离9，将肝胞膜及结缔组织分离制成悬液，置37度培养箱中培养温育20MIN10,用PERCOLL细胞分离液25％－50％的浓度梯度，在加梯度液时要缓慢加，最好用细的吸管沿管壁加，在吸取中层细胞时，可先将上层的25％PERCOLL吸去，在小心吸取细胞。

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