【细胞种类】小牛肺动脉平滑肌细胞第5代；【培养液】含15％FBS的MEM液；【固定方法】70％酒精固定；【染色方法】PI单染法；【具体步骤】1、接种：以10*5/ml密度（活细胞）接种，加培养液；2、同步化：24h后加不含FBS的MEM进行同步化12－24h；3、加因素：弃MEM液换等量的培养液，加药物等因素培养到指定时间；4、消化：用不含EDTA的0.25％胰酶进行消化，离心（2000转5min）；5、洗涤：用PBS液洗一边，弃上液；6、固定：向10ml试管内加2.5ml盐水G溶液（配置方法见司徒镇强《细胞培养》）重新悬浮细胞，然后缓慢加入－20度预冷的95％酒精7.5ml，冰浴30min；（可以过夜，第二天染色）7、PI单染法：吹散细胞后用300目尼龙滤膜过滤，然后离心，去上液；加100ul5mg/mlRNA酶溶液，37度保温30min，然后冰浴终止酶作用；加PI染液（100ug/ml）闭光染色30min；8、FCM测细胞周期。【注意点】1、同步化是为了各单个细胞处于相对的同一周期内，即“饥饿疗法”，目前虽有争议，但这一步是不可或缺的。2、对于PI单染还是双染好，目前也是意见不一，本实验采用单染法。3、300目尼龙滤膜过滤是为了减少聚在一起的细胞团，防治堵塞流式仪。

================  蚂蚁淘在线  ================

免责声明：本文仅代表作者个人观点，与本网无关。其创作性以及文中陈述文字和内容未经本站证实，对本文以及其中全部或者部分内容、文字的真实性、完整性、及时性本站不做任何保证或承诺，请读者仅作参考，并请自行核实相关内容

版权声明：未经蚂蚁淘在线授权不得转载、摘编或利用其他方式使用上述作品。已经经本网授权使用作品的，应该授权范围内使用，并注明“来源：蚂蚁淘在线”。违反上述声明者，本网将追究其相关法律责任。