Purpose:

ToperformrestrictiondigestsofYACsformappingusingrarecuttingenzymesormoreconventionalrestrictionendonucleasedigestion.

Timerequired:

2-4hours

SpecialReagents:

• dependentuponenzymesdesired

Procedure:

1. Usingwide-borePipette,aliquot100ngofliquidDNAintoEppendorftube.Add2.5祃10Xrestrictionbuffer,1-2ulRNase(5mg/mlstock),250-500ngBSA,thendH2Oupto25祃volume.Incubateatappropriatetemperaturefor2-4hours.

2. Stopthereactionbyadding3祃of10Xglycerolstopmix;mixintubegently,thenmicrofugefor15seconds(ratherthanpipetteupanddown,whichmaysheartheDNA).

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