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细胞表面抗原染色的组织样本制备方法
该方法适用于新鲜和冷冻标本 1.将组织(10-20mm)切成1-2mm的碎片,用缓冲液或培养液浸湿。2.用1ml缓冲液或培养液预洗Medicon二遍。3.将组织和1ml缓冲液或培养液放入到Medicon中,盖上盖子,将Medicon插入到Medimachine中。4.降解组织。降解组织的时间长短依赖于组织类型。(参见降解时间表)。5.用注射器通过Medicon上的注射器接口将上清吸去。6.用1ml缓冲液或培养液冲洗Medicon三遍。7.选择适当大小孔径的Filcon滤器过滤细胞悬液。(50-mmFilcon适用于大多数组织,如:淋巴结、肿瘤组织、皮肤组织)8.用1ml缓冲液或培养液冲洗Filcon三遍。9.250g离心细胞悬液5分钟。10.用适当的缓冲液或培养液重悬细胞沉淀。11.若需要,重复3-10步骤。12.调节细胞浓度至5×105-1×106/ml。13.用适当浓度的抗体在2-80C与100ml细胞悬液孵育15-30分钟。14.加2ml冷的缓冲液或培养液(2-80C),250g离心5分钟。15.用缓冲液或培养液重悬细胞沉淀。16.分析样本。 注意: 1.在处理和接触有感染危险性生物样本时,应根据相关法规处理废液。避免皮肤或粘膜接触样本。勿用嘴移液。2.该方法虽经验证,但客户需根据自己实验室条件及所处理的组织类型进行适当调整。 降解时间表: 组织 数量(3-6mm3小块) 脉冲 时间 条件 乳腺组织 3-6 2次 30秒 新鲜或冷冻 膀胱 4-5 2次 20秒 新鲜或冷冻 结肠 3-6 2次 20秒 新鲜或冷冻 胃 4-6 2次 20秒 新鲜或冷冻 胃肿瘤边缘组织 3-6 2次 20秒 新鲜或冷冻 健康组织、胃肿瘤 3-4 2次 20秒 新鲜或冷冻 淋巴结 3-6 2次 15秒 新鲜或冷冻 脾脏 3-6 2次 15秒 新鲜或冷冻 肝脏 3-6 2次 15秒 新鲜或冷冻 卵巢 3-6 2次 30秒 新鲜或冷冻 前列腺 2-3 2次 35秒 新鲜或冷冻 脑组织 3-6 1次 10秒 新鲜或冷冻 肺组织 2-3 2次 30秒 新鲜或冷冻 子宫 3-6 1次 60秒 新鲜或冷冻 皮肤 3-4 1次 45秒 新鲜或冷冻 注意: 该方法虽经验证,但客户需根据自己实验室条件及所处理的组织类型进行适当调整。
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