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Human Embryonic Stem (ES) Cell Protocols——Embryonic Bodies

蚂蚁淘  /发布时间:1630690202 /浏览量:301   

  • LethumanEScellsgrowuntilthecoloniesarelargeandthecellsareprettypiledup-aboutthetimewhenyouwouldnormallysplitorevenadaypastthat.
  • Treatcellswith0.2-0.5mg/mldispase.YouwanttousethelowestpossIBLeconcentrationofdispase,butittendstovaryabit.
  • Waituntilthecoloniescompletelydetachfromtheplate.Donotblowcoloniesoffwithapipet.Thisshouldtakeabout20-30min.Ifnothingishappeningbythatpoint,addmoredispase.
  • Oncethecoloniescomeup,gentlytransferthemtoa15mlconicaltubewitha10mlpipet.Youdon"twanttobreakupthecolonies.
  • Thecellsshouldsinktothebottomofthetubeafteraminuteortwowithoutanyspinning.AspirateoffthemediaandwashonceinhESmedia.Ifyouareinahurryandneedtospinthecoloniesdown,1minat500rpmisenough.
  • TransfercellstoaflaskcontainingESmediawithoutbFGF.PutalloftheEBsfromone6-wellplateintoaT80flaskwithabout25mlsmedia.
  • Thecellswillroundupintoactualembryoidbodiesafterabout12-24hrs.Theyshouldthenbefedeverydaybyexchanginghalfthemediawithfreshmedia.TheEBsshouldnotattach,iftheydo,gentlytaptheflasktodislodgetheEBs.

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