原代细胞培养是指细胞分离之后至初次传代之前的细胞培养阶段。

原代细胞培养四个阶段：1.获取样品2.分离组织3.解剖或解离组织块4.接种于培养器皿中培养

原代细胞培养种类：

1.将组织块贴附于适宜的基质中，细胞可自组织块向外迁移生长。

2.将组织块用机械法或酶消化法处理后获得细胞悬液，接种细胞悬液，其中部分细胞黏附于基质生长。

酶的种类：胰蛋白酶

     胶原酶

     弹性蛋白酶

     链酶蛋白酶

     裂解酶

     脱氧核糖核酸酶

     透明质酸酶

这些酶即可单独使用，又可联合应用。

原代细胞培养共同需要的条件：

在取材时需去除脂肪和坏死组织；

为减少对组织的损伤，需用锋利的器具；

适度离心以去除用于解离的酶；

由于原代培养组织细胞的存活率很低，原代培养的细胞密度应高于正常传代培养的细胞密度；

营养丰富的培养基如Ham’sF12比简单的培养基（Eagle’sMEM）更可取。如添加血清，胎牛血清比牛或马的血清更好，细胞成活率更高。特殊细胞类型的分离可能需要选择性培养基。

与成体组织相比，原代培养时用胚胎组织更易分离，细胞更易存活，增殖速度更快。

组织分离：对人或动物组织处理之前，请确认你的工作符合医学伦理学规则和现行的动物实验法规。对人体活检或胚胎组织进行研究时获得本地伦理委员会、病人及其亲属的同意。

若取材部位容易被污染（如皮肤）应先用75%乙醇消毒，在无菌条件下切除组织，放在取材用转运培养基中，尽快转移至培养室。若只能延迟转移，可于4℃保存，不超过72h，但是转移越快存活率越高。

取材的基本要求：

速度要快，新鲜组织2h内送到实验室；

常温或者4度保存运输，切勿冻存；

严格无菌环境：所用离心管和试剂等均为无菌级，密封良好；

保存方式：液体样本采用无菌离心管（血液用抗凝管）；组织样本放入盛有2%双抗的PBS溶液的无菌离心管中，管口用封口膜封紧。

分离组织并进行原代培养，是特殊功能细胞培养的也是一个重要的阶段。

不同种类的细胞原代培养应采用相应的技术方法，选择好的途径，参考以前的相关工作文献。

课题设计、基金申请、文章润色、实验外包基尔顿生物欢迎您的咨询！