人Taf4-beta基因快速荧光定量PCR试剂盒

CatNo：TOPQ0013

产品内容

产品组成	20μl×50rxn	20μl×100rxn
2×FastqPCRPreMix	0.5ml	1.0ml
Taf4-beta F	100μl ×1tube	200μl ×1 tube
Taf4-beta R	100μl ×1tube	200μl ×1 tube
GAPDH F	100μl ×1tube	200μl ×1 tube
GAPDH R	100μl ×1tube	200μl ×1 tube
RNase-FreeddH2O	1.5ml	1.5ml×2 tube

储存条件

收到本产品后，请立即置于-20℃避光保存。从-20℃取出使用时，将冻存的Fast qPCRPreMix 冰上融解，然后轻轻颠倒混匀，待溶液完全均一后使用。如解冻后没有使用，须彻底混匀后重新冷冻。(在解冻过程中盐会出现分层现象，未混匀进行冷冻，盐晶体的析出将会对酶造成损害)。如需一段时间内经常取用，可在2～8℃条件下储存3个月。避免反复多次冻融。

产品简介

本产品的靶基因人Taf4-beta（基因ID：6874）的引物纯度和引物特异性已经通过实验检验，采用SYBRGreenI嵌合荧光法进行Real-TimePCR的专用试剂，可对目标DNA进行快速、特异性的定量检测。优化的预混液可缩短Real-TimePCR的反应时间，适用于标准或快速PCR仪。FastqPCRPreMix采用了抗体修饰的TaqDNA聚合酶，配合独特的快速PCR Buffer体系可确保在所有的Real-TimePCR仪上进行灵敏的qPCR反应，具有反应快速、PCR反应时间缩短60%，同时具有高扩增效率，高扩增特异性和宽广的可信范围的特点，使你在不影响PCR效果的前提下更快获得结果，节约科研时间和能源，方便客户使用。

试剂盒特点

    1. 靶基因的引物纯度和引物特异性已经通过实验检验，方便客户使用。
    2.  Fast qPCRPreMix采用了抗体修饰的TaqDNA聚合酶，配合特制的快速PCR Buffer体系，可大大缩短变性、退火与延伸时间，可节省多达60%的反应时间，快速获得实验结果。
    3.  本产品特制的快速PCRBuffer体系含有独特的PCR稳定因子，在不损失PCR灵敏度和特异性的基础上进行快速反应，保证了qPCR高扩增效率，高扩增特异性和宽广的可信范围的特点。
    4.  FastqPCRPreMix中预混有SYBRGreenI，PCR反应液配制时，只需加入模板、引物、灭菌蒸馏水便可进行快速Real-TimePCR反应，操作简单方便。

试剂盒原理

    1.  本产品采用了特异的抗体修饰热启动DNA聚合酶进行快速PCR扩增，通过检测反应进程中SYBRGreenI的荧光强度，达到检测PCR产物扩增量的目的，适用于标准和快速PCR仪。
    2. 本产品中特异的抗体修饰热启动DNA聚合酶，95℃条件下孵育3 min即可激活全部酶活，在缩短变性时间的同时避免了非特异性产物的扩增。
    3. 本产品的快速 PCRBuffer体系添加了独特的PCR稳定因子，配合精心优化的快速PCR Buffer体系，可大大缩短变性、退火和延伸时间，使PCR总运行时间缩短60%，更快获得实验结果，而不影响PCR反应效果。
    4. 本产品针对cDNA模板和gDNA模板结构组成的差异，对PCR的反应步骤进行了特别的优化，使较难扩增的gDNA模板也能获得良好的PCR结果。

操作方法

    1. 试剂准备：
     取FastqPCRPreMix(如果保存在-20℃)，模板，引物和RNase-FreeddH2O，并将所有试剂在室温下溶解并彻底混匀。
    2. 反应体系的配制：
     建议置于冰上进行定量PCR反应液的配制。

组成	20μl体系	50μl体系	终浓度
2×FastqPCRPreMix	10ul	25ul	1×
Taf4-beta F	2ul	5ul
Taf4-beta R	2ul	5ul
Template	-	-	Upto50ng
RNase-FreeddH2O	Upto20μl	Upto50μl	-

    *内参基因（GAPDH)的体系配置同上
    *引物终浓度为200nM可以在大多数体系中获得良好的扩增结果。扩增效率不高时，可提高PCR反应体系中引物的浓度；当发生非特异扩增时，可适当减少PCR反应体系中的引物浓度。引物浓度可以在200-500nM范围内调整。
    *反应体系配制完成后盖上反应管，轻柔混匀。可短暂离心，确保所有组分均在管底。
    3.  将反应体系置于荧光定量PCR仪中，开始反应。
    4. Real-TimePCR反应
      两步法PCR反应程序：

阶段	循环	温度	时间	内容	信号采集
预变性	1×	95	3 min	预变性	否
PCR反应	40×	95	10sec	变性	否
	40×	60	34 sec	退火/延伸	是
熔解曲线分析

注意事项

    1. 本产品中含有荧光染料SYBRGreenI，保存本产品或配制PCR反应液时应避免强光照射。如果试剂没有混匀，其反应性能会有所下降。使用时请上下颠倒轻轻混匀，请不要使用振荡器进行混匀，尽量避免出现泡沫，并经瞬时离心后使用。
    2.  本产品中使用1×引物终浓度（0.2μM）可以在大多数体系中获得良好的扩增结果。如果需要进一步优化，客户可以在0.2-0.5μM范围内调整引物浓度。
    3.  本产品的20μl反应体系中，cDNA模板的使用量一般小于100ng，基因组DNA模板量一般小于50ng，逆转录产物作为模板时，cDNA使用量应不超过PCR体系终体积的20%。

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