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逆转录酶的来源及属性分类
目前市面上有很多种逆转录酶,其基本属性可根据来源不同分为以下三种:
1.AMV逆转录酶:从禽类成骨髓细胞白血病病毒(AvianMyelobastosisVirus,AMV)纯化到的禽类成髓细胞病毒(AMV)逆转录酶,有强的聚合酶活性和RNaseH活性。最适作用温度为42℃。
2.MMLV逆转录酶:从表达克隆化的莫洛尼鼠白血病病毒(MoloneyMurineLeukemiaVirus,MMLV)反转录酶基因的大肠杆菌中分离到的鼠白血病病毒(MMLV)逆转录酶,有强的聚合酶活性,RNaseH活性相对较弱。最适作用温度为37℃。
3.Thermusthermophilus、Thermusflavus等嗜热微生物的热稳定性逆转录酶:在Mn2+存在下,允许高温反转录RNA,以消除RNA模板的二级结构。
另外,市面上还有SuperRT逆转录酶,HiFi-MMLV逆转录酶以及MMLV逆转录酶的RNaseH-突变体(商品名为SuperScript和SuperScriptⅡ)等等多种逆转录酶种类。其中MMLV逆转录酶(RNaseH-)与其它酶相比能将更大部分的RNA转换成cDNA,这一特性允许从含二级结构的、低温反转录很困难的mRNA模板合成较长cDNA。
根据目前所搜集的逆转录酶产品,其常见规格一般为:200U,300U,500U,600U,1000U,5000U,10000U,20000U,50000U。另外还有一些逆转录酶有4000U,40000U等几种规格。
此外,还可根据逆转录酶这种产品的包装分为原装和分装两种。
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