2007-09-24【求助】关于腺病毒的纯化

一般都是用CsCl梯度离心吧，但是转数要高哦其实很多时候用不着纯化，多次转染扩增之后低毒就上去了我们实验室都没纯化主要经费太少

我们这边刚好实验室装修，超速离心机停用了。同时我的实验后期的做动物实验，所以病毒需要纯化。

细看了这个盒子的说明书，细节方面说的很好，也要求操作的时候的非常小心才行。

试剂盒纯化得到的病毒往往有活性的病毒比率低，因为任何试剂盒都没办法区分死病毒和活病毒的，而CsCl密度梯度离心可以通过死病毒（主要是不含基因组的空壳病毒）和活病毒的密度不同来分开死病毒和活病毒。通常VP可以代表病毒总数，PFU可以代表有感染能力的活病毒。一般试剂盒纯化的VP:PFU在100：1左右。CsCl纯化后VP:PFU在30：1左右,好的情况下可以得到20：1，当然任何纯化方法都不能完全去掉死病毒（空壳病毒），虽然最终得到的病毒死病毒比率那么高，但腺病毒本身的高感染效率使得腺病毒作为一个基因转移的金标准。普通的转染试剂以及AAV,慢病毒都远远达不到腺病毒的感染效率（慢病毒的包膜不稳定，反复冻溶两三次后几乎就丧失了感染能力）。

验证纯化病毒的活性，区分死病毒和活病毒可以用“感染性病毒郊价测定试剂盒”进行。国内有相关试剂盒，0755-26031015

德国的塞多利斯的腺病毒纯化试剂盒纯化很好用的,就是有点贵.但是节约时间,

请问你要纯化的病毒是3型还是5型的？我做的是3型的，不知道能不能用这个牌子的试剂盒？求高手回复，谢谢

我纯化的病毒是是5型的腺病毒，效果还行！