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回复:时间:2018-03-31
ELISA试剂盒试验以灵敏度较高、特异性较好的特点在临床上得到了广泛的应用,但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大,如不注意,有可能导致显色不全、花板等结果。我将操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下,以期给同行带来一些启发,提高试验质量。ELISA试剂盒试验操作中可能影响结果的原因及解决办法分析:1选择试剂选择质量优良的检测试剂,严格按照试剂说明书进行操作,操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。2加样可能原因:1)血清或血浆标本分离不好即进行加样;2)手工操作中,加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时);3)加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。ELISA试剂盒解决办法:1)标本为血清:最好将血液先自然存放1-2小时后,再用3000rmp离心15分钟;标本为血浆:必须使用含抗凝剂的血液标本收集管,采血后必须立即颠倒采血管混合5-10次,放置一段时间后,3000rpm离心15分钟;若在几天内检测,可放在2-8℃冰箱中,若要贮存,则置于-20℃的低温冰箱内。2)加样后及时放入孵箱。3)加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。4)如果采用AT或其他全自动加样,最好选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。5)标本较多时,请分批操作。3孵育可能原因:1)孵育时未贴封片或加盖,使标本或稀释液蒸发,吸附于孔壁,难于清洗彻底;2)孵育时间人为延长,导致非特异性结合紧附于反应孔周围,难以清洗彻底。
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