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Peptide Inhibition ELISA Protocol

蚂蚁淘  /发布时间:1545760209 /浏览量:30   

  1. PBS
  2. PBS:0.1%BSA:0.05%Tween20(PBT)
  3. PBS:2%BSA
  4. 10XSubstrateBuffer,pH6.036.6gCitricAcid,monohydrate113.5gPotassiumdibasicphosphateDissolvein900mldi-H2O.CheckpHandadjustto6.0ifnecessary.Qs.to1liter.
  5. 30%H2O2
  6. OPDStock,4.0%4gOPDin100mldi-H2O.Aliquotandstoreat-20oC.Protectfromlight.
  7. 4.5NH2SO412.0mlConcentratedSulfuricAcid88.0mldi-H2O

Procedure

  1. TiterMAbsupesatserial5-folddilutionstodeterminetheconcentrationatwhichthetiterbeginstodrop.
  2. DilutetheMAbtoone-halftheabovedilutioninPBT
  3. Dilutespecificandnon-specificpeptidesto200mg/mlinPBT.
  4. Inamicrotiterplate,mixequalvolumesofthepeptidedilutionsandtheMAbsupe.AddanequalvolumeofPBTandMAbasthecontrol.
  5. Incubate1hourat37oC.
  6. Transfer50mltoanantigencoatedplates,whichhasbeenblockedwithPBS:2%BSAfor1hourat37oC.
  7. Incubatefor1hourat37oC.
  8. Wash3timeswithdi-H2O.
  9. Add50ml/wellanti-mouseIgG:HRPdilutedinPBS:0.1%BSA:0.05%Tween20.
  10. Incubatefor1hrat37oC.
  11. Wash5timeswithdi-H2O.
  12. Add50ml/wellworkingsubstratesolution0.5ml4.0%OPD50ml30%H2O21.0ml10XSubstratebuffer8.5mldi-H2O.
  13. Incubatefor20minutesatroomtemperature.
  14. Add25ml/well4.5NSulfuricAcid
  15. ReadA490

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