2021-08-04ELISA试剂盒常见问题与解析

今天文章就简单整理了一下最近遇到的问题，有些问题对你来说可能很简单，但是还是会给一些科研菜鸟带去小麻烦，特整理了这么个专场来涨涨姿势。

这里就简单整理了5个问题，具体内容如下：

1、一个ELISA试剂盒检测几个样品？

小编自己在各大论坛看到最多的三个答案：

1）48T可做42个样本加6个标准曲线；96T可做90个样本加6个标准曲线

2）以96T试剂盒来算，定量的试剂盒一般可以做90个左右的样品，定性的试剂盒可以做94个左右的样品

3）96T的ELISA试剂盒，去除标准品复孔检测，最多还能检测80个标本；48T的最多30个样本。

2、elisa试剂盒96T的能做检测多少血清样品？板能重复利用吗？

96T，一般做复孔的话，做标准曲线需要16个孔，剩下80个孔就可以做40个样本。这个板不能重复利用。而且配套的试剂也只是够一块板子用的。

3、想请教一下，我想用elisa法测血清里的一种抗原，查了资料，发现没有现成的试剂盒用，现在就有2种备选方案，一种是买抗体对自己包被（查了R&D等大公司都没有可用于elisa的单抗）。哪种比较好呢？自己包被的会不会比国产的试剂盒可靠呢？

如果你觉得技术不错有队其他公司不放心，可以自己购买抗体对自己包被，这个就是麻烦点，自己包被用着放心，舒心；

另外国内还是有一些资质不错的公司，如北京达科为，上海巧伊，依科赛，深圳欣博盛等等

4、western和ELISA处理样本有何差别？

WesternBlot样品制备要加蛋白裂解液（含有蛋白酶抑制剂），然后冰上研磨，收集于EP管，冰上裂解30min，4度12000rpm离心15min，取上清分装，即得到蛋白样品。建议直接电泳，多余的-80保存。建议分装的蛋白每支略多于一次上样量，一次性用完一支，避免反复冻融。

ELISA样品，直接脑组织冰上匀浆，收集于EP管，同上一样离心，大约220-250ul每支分装（因为ELISA上样量基本都是每孔100ul，做复孔，每个样品2孔，就需要200ul，为了避免不够2孔，分装时要大于200ul每支），直接实验。多余的-80保存，一样避免反复冻融。

不过ELISA最好少量样品进行预实验，或者查阅文献，看看大概组织里有多高浓度，选择合适的试剂盒，测量范围要与组织浓度相符。避免浓度过高测量不准，或者浓度过低，小于试剂盒最低可测浓度。

5、Elisa试剂盒该买哪家公司的呢？

提出这个问题的朋友其实该打，目前国际上各个品牌的试剂盒生厂商，都会有其偏重点，像R&D在细胞因子方面的试剂盒就非常牛逼，而其他牌子也一样的。

Bender：粘附分子方面的试剂盒；

Cayman：花生四烯酸类产品的试剂盒；

Merck(Linco)：内分泌研究方面的试剂盒；

Tips：

1、买Elisa试剂盒时，尽量先查文献，通过文献找品牌，再找供应商，找供应商就找正规代理商，千万不要去干“赔夫人又折兵”的蠢事。

2、ELISA中，复孔就是同一个样品加到至少两个孔中（一般3个或4个），最后取其平均值作为样品的读数，这样测得的结果才有说服力！

做复孔是为了较好的较少组内差异，如果血清不足不做复孔也可以。