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ELISPOT分析技术服务
提供商: | 汉藤 |
服务名称: | ELISPOT分析技术服务 |
规格: | 次 |
- Elispot
检测原理ELISPOT就其原理来说实在是很简单的,从本质上说和ELISA的原理是一样的:细胞受到刺激后局部产生细胞因子,此细胞因子被特异单克隆抗体捕获。细胞分解后,被捕获的细胞因子与生物素标记的二抗结合,其后再与碱性磷酸酶标记的亲和素结合。BCIP/NBT底物孵育后,PVDF孔板出现“紫色”的斑点表明细胞产生了细胞因子,通过ELISPOT酶联斑点分析系统对斑点的分析后得出结果.
- 与ELISA的区别
ELISPOT法源自ELISA,又突破传统ELISA法,是定量ELISA技术的延伸和新的发展。两者都是检测细胞产生的细胞因子或其他可溶性蛋白,它们最大的不同在于:
1、ELISA通过显色反应,在酶标仪上测定吸光度,与标准曲线比较得出定量的可溶性蛋白总量。
2、ELISPOT通过显色反应,在细胞分泌这种可溶性蛋白的相应位置上显现清晰可辨的斑点,可直接在显微镜下人工计数斑点或通过ELISPOT分析系统对斑点进行计数,1个斑点代表1个活性细胞,从而计算出分泌该蛋白或者细胞因子的细胞的频率。(某些研究不仅要测细胞因子生成量,还需检测分泌此细胞因子的细胞频率)
3、由于是单细胞水平检测,ELISPOT比ELISA和有限稀释法等更灵敏,能从20万-30万细胞中检出1个分泌该蛋白的细胞。
4、捕获抗体为高亲和力、高特异性、低内毒素单抗,在研究者以刺激剂激活细胞时,不会影响活化细胞分泌细胞因子。
- 预包被ELISpot
1.特异性单抗包被在培养孔底部,通过非特异性蛋白溶液封闭多余空白位点
2.加入单个细胞悬液及刺激物培养,阳性细胞经活化分泌细胞因子,细胞因子就近被特异性包被抗体捕获;
3.移出细胞,板底留下细胞因子的“影像”
4.加入酶标记的检测抗体,检测抗体和“影像”——细胞因子结合,形成“抗体-抗原-抗体”夹心结构
5.加入显色底物,在酶的催化分解下,生成不可溶的色素,沉淀在膜上,即形成斑点
6.斑点计数,结果分析。
应用范围
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