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Nitrocefin头孢硝噻吩/β-内酰胺酶活性检测显色底物

产品标签：

Nitrocefin头孢硝噻吩；Cephalosporin头孢菌素；beta-lactamasesβ-内酰胺酶活性；β-内酰胺类抗生素耐药菌筛选；CAS：41906-86-9

基本描述：

头孢硝噻吩（Nitrocefin，CASNO：41906-86-9），具有显色特性的一种头孢菌素（cephalosporin），通常用来检测由β-内酰胺类抗生素耐药菌代谢产生的β-内酰胺酶（beta-lactamases）活性。

作用机制：

基本上所有β-内酰胺酶能以头孢硝噻吩为底物，将其β-内酰胺环上羰基碳和氮基间的酰胺键水解，可通过肉眼直接观察这一颜色变化的过程，最初完整的头孢硝噻吩处于紫外吸光区（~380nm，黄色），而水解后的产物迁移到可见光光谱区（~500nm，红色）。见下图：

图片1：溶液制备和加入β-内酰胺酶前后的溶液颜色变化

(A)：溶于DMSO的头孢硝噻吩储存液（浓度：10mg/ml）。

(B)：将（A）液用PBS缓冲液稀释所得到的工作液（浓度：1mg/ml）。黄色即表示具完整结构，未降解的头孢硝噻吩。

(C)：将25U的β-内酰胺酶滴到（B）液上方。红色是由β-内酰胺酶介导的头孢硝噻吩水解后产生的颜色。

(D)：将（C）管漩涡混匀后的图片。

基本特性：

1）  CASNO：41906-86-9

2）  分子式：C21H16N4O8S2

3）  分子量：516.51

4）  纯度：≥95%（HPLC）

5）  外观：橘色粉末

6）  溶解性：DMSO（10mg/ml）

7）  保存方法：-20°C避光保存。储存于惰性气体下。

微生物学应用和检测方法：

1）  应用：

头孢硝噻吩（Nitrocefin）用来检测敏感性β-内酰胺类抗生素耐药菌代谢产生的β-内酰胺酶活性。

2）检测方法：

一旦接触β-内酰胺酶产生菌，样本能快速产生阳性反应。然而，建议20-30min的反应时间，同时设置阴性对照。可通过多种方法来检测，1）玻片表面反应（slidesurfaceassay）；2）直接接触反应（directcontactassay）；3）肉汤培养液反应（brothsuspensionassay）；4）细胞裂解液反应（lysedcellassay）；5）滤纸法检测（filterpaperassay）。

3）检测步骤：

以肉汤培养液反应（brothsuspensionassay）为例，其他方法请联系我司（MKbio，021-54736159）。

a，取1ml肉汤培养液，加入3-5滴1.0mg/ml的头孢硝噻吩工作液；b，20-30min内观察颜色变化，若红色产生，表示具β-内酰胺酶活性。

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使用文献（TOKU-E，货号：N005）：

1、Zhangmingetal.usednitrocefinfromTOKU-EasasubstratetostudyTEM-1ß-lactamaseactivityfromE.coli."Label-FreeMeasurementsofReactionKineticsUsingaDroplet-BasedOptofluidicDevice."

2、Liuetal.usednitrocefinfromTOKU-Etostudyanddevelopahomogeneousbiosensor."Parts-per-MillionofPolyethyleneGlycolasaNon-InterferingBlockingAgentforHomogeneousBiosensorDevelopment."

3、Dahlinetal.usednitrocefinfromTOKU-Einasurrogateß-lactamase-nitrocefinassay."ACell-FreeFluorometricHigh-ThroughputScreenforInhibitorsofRtt109-CatalyzedHistoneAcetylation."

4、Ohlhoffetal.usednitrocefinfromTOKU-EasasubstratetostudytheactivityofEstG34ß-lactamases."AnunusualferuloylesterasebelongingtofamilyVIIIesterasesanddisplayingabroadsubstraterange"

5、Huangetal.usednitrocefinfromTOKU-EasasubstratetostudytheactivityofVIM-2Metallo-ß-lactamases(MBLs)."InhibitingtheVIM-2Metallo-ß-LactamasebyGrapheneOxideandCarbonNanotubes."

6、EzeEetal.usednitrocefinfromTOKU-Etoconfirmbeta-lactamaseproductioninE.coliandKlebsiellaspeciesfromNigeria.Readmorehere:"OccurrenceofBeta-LactamasesandtheAntibiogramPatternofClinicalIsolatesofEscherichiacoliandKlebsiellaSpeciesinNsukkaMetropolis."

7、Choietal.measuredenzymaticactivityofengineeredproteinswitchesbyexploitingnitrocefinhydrolysis.Readmorehere:"ElectrochemicalActivationofEngineeredProteinSwitches."

8、Pierre,etal.usednitrocefinfromTOKU-Etomeasuretheenzymaticacivityofvariousbeta-lactamases.Readmorehere:"MolecularDeterminantsforProteinStabilizationbyInsertionalFusiontoaThermophilicHostProtein."

9、TullmanandNicholes,etal.usednitrocefinfromTOKU-Etostudyandcharacterizeenzymaticproteinswitches.Readmorehere:"Enzymaticproteinswitchesbuiltfromparalogousinputdomains."

严重声明：本品仅能用作生物科研用途，不可他用。