o  细胞培养使用血清浓度为2％～5％，由于国内血清质量差异，建议使用前进行细胞培养筛选，并建议实际使用血清浓度不低于3% 。o  BHK21细胞可直接用4～5％血清浓度培养基进行转瓶细胞培养，培养初期可能细胞培养状态略差，适应几代后能良好生长。o  如用方瓶进行4～5％血清浓度培养基进行几代适应培养后再进行转瓶培养，细胞培养效果更好。o  如依次用10%血清浓度、8%血清浓度、5%血清浓度、3%血清浓度传代适应细胞，细胞培养效果更好。o  如用4～5％血清浓度培养基进行BHK21细胞适应培养后，冻存适应的细胞建立低血清细胞种子库，用该库细胞复苏进行低血清培养，细胞培养效果更佳。o  用于培养的细胞培养液应按产品说明书标示量加入碳酸氢钠，配液后pH为7.2～7.4；培养液如常时间搅拌或长期存放，pH可能增加；用于培养细胞的培养液，pH为7.4～7.6，一般情况下不影响细胞培养效果。不可随意减少或增加碳酸氢钠的使用量，否则影响培养液的缓冲能力和渗透压。o  用于细胞消化的细胞消化液，应现配现用，或冻存使用，应注意消化液细胞消化效果，应在2～3分种内完成细胞消化。o  应控制细胞消化的时间和细胞消化液的加量，倒去细胞消化液时，细胞应附着良好，放置1～2分种后，细胞能自然滑落，应避免细胞成片垮掉。o  初次用于低血清传代的种细胞质量，对于传代成功性极为重要；应选择良好的细胞用于低血清适应培养，应当在细胞刚生长为致密单层时即传代，传代时细胞培养液pH应保持6.8～7.0左右，传代2～3代后，作为种细胞用于低血清细胞培养。o  控制细胞传代分种比例是成功培养的关键之一。初次用于低血清传代的种细胞，分种比例建议用1:4～1:6，待细胞完全汇合后略微生长为致密单层即传代，之后可适当增加传代分种比例至1:6～1:9。o  控制细胞传代生长的pH是成功培养的关键之一。细胞培养液pH降低到6.8～7.0，应及时传代。o  控制细胞传代生长状态是成功培养的关键之一。细胞培养第1天细胞汇合率应为40％～80％，培养第2天应为单层细胞，细胞生长为致密单层应及时传代，不可延长细胞培养时间。o  控制细胞传代生长时间是成功培养的关键之一，通常培养2天应及时传代。o  按以上程序和注意事项进行BHK21细胞低血清培养，如细胞不能正常贴壁培养，应考虑细胞瓶质量，建议用新的细胞培养瓶按正常程序处理后进行细胞培养；或考虑BHK21细胞质量，更换低代次或不同来源BHK21细胞进行细胞培养。o  转瓶低血清培养BHK21细胞，细胞培养液中通常可见油膜状物或白膜状物出现，以及较多悬浮细胞，均为正常的细胞悬浮培养物，不影响细胞培养生长。o  BHK21细胞低血清培养，通常生长为单层细胞，该细胞具有更好的细胞活力，与传统的复层细胞比较，能更好的支持病毒培养，不影响病毒滴度。o  BHK21细胞低血清培养，细胞培养致密单层后接种口蹄疫病毒，维持液为乳欧液或低血清培养基，病毒接种培养工艺同大生产；但由于不同厂家病毒培养工艺的差异，可能导致病毒收获时间的差异，建议接种病毒后每2～3小时取样，检测病毒滴度，确定病毒收获时间。 编辑： tong202 来源：清大天一