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方案 21.9 悬浮培养细胞生长曲线的绘制实验一方案21.9 悬浮培养细胞生长曲线的绘制

蚂蚁淘 /发布时间:1533494099 /浏览量:18

实验方法原理	以三种不同细胞浓度进行系列细胞培养，每天计数细胞直至平台期。
实验步骤	材料无菌悬浮细胞培养培养液，l00ml D-PBSA(细胞计数用） 24孔板非无菌装培养板的塑料盒 CO₂温箱或5%C0₂以充盈塑料盒操作步骤 1.如单层培养那样（见方案21.8)将生长液中的细胞悬液以不同浓度加人到孔中。 2.以不同时间从三孔中取样0.4ml，注意细胞要充满混匀以及完全分散成单个。 3.用电子细胞计数器汁数（见21.1.2节）或用血球计数器计数（见21.1.1节)。 4.计算每个样本的细胞浓度，像单层细胞生长一样以时间作对数线性作图（见21.9.3节）。细胞密度不适用于悬浮培养，因为它们不会贴附。提示接种2个75cm²培养瓶，每瓶20ml不同农度的细胞悬液。按需要每天从瓶中取0.4ml，但取样前要混匀细胞。培养瓶离开温箱的时间要尽量短，在画生长曲线期间不要换培养液。或者将培养瓶装在振荡器上（Techne，Integra，BeHco)，每天取样。如果用振荡培养瓶在一侧瓶口封膜，则不用从温室中取出培养瓶，也不用打开封口膜就可以取样，将膜面擦净，颠倒一下瓶子用注射器就可将液体吸出。

实验方法原理

以三种不同细胞浓度进行系列细胞培养，每天计数细胞直至平台期。

实验步骤

材料

无菌

悬浮细胞培养
培养液，l00ml
D-PBSA(细胞计数用）
24孔板

非无菌

装培养板的塑料盒
CO₂温箱或5%C0₂以充盈塑料盒

操作步骤

1.如单层培养那样（见方案21.8)将生长液中的细胞悬液以不同浓度加人到孔中。

2.以不同时间从三孔中取样0.4ml，注意细胞要充满混匀以及完全分散成单个。

3.用电子细胞计数器汁数（见21.1.2节）或用血球计数器计数（见21.1.1节)。

4.计算每个样本的细胞浓度，像单层细胞生长一样以时间作对数线性作图（见21.9.3节）。细胞密度不适用于悬浮培养，因为它们不会贴附。

提示接种2个75cm²培养瓶，每瓶20ml不同农度的细胞悬液。按需要每天从瓶中取0.4ml，但取样前要混匀细胞。培养瓶离开温箱的时间要尽量短，在画生长曲线期间不要换培养液。或者将培养瓶装在振荡器上（Techne，Integra，BeHco)，每天取样。如果用振荡培养瓶在一侧瓶口封膜，则不用从温室中取出培养瓶，也不用打开封口膜就可以取样，将膜面擦净，颠倒一下瓶子用注射器就可将液体吸出。

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