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2.10 RNA 在甲酰胺中的溶解保存一RNA 在甲酰胺中的溶解保存
蚂蚁淘
/发布时间:1631813409 /浏览量:148
| 试剂、试剂盒 | 无水乙醇异丙醇的乙醇甲酰胺3molL的乙酸钠 仪器、耗材 | 高速离心机紫外分光光度计
实验步骤 | 一材料与设备 所有的试剂配制均需采用经过蒸馏并消毒的去离子水。 1)无水乙醇 2)异丙醇 3)75%的乙醇 4)100%甲酰胺 5)3mol/L的乙酸钠 6)高速离心机 7)紫外分光光度计 二操作方法 1)使用CsCl法，酸-苯酚法，TRIol法或RNaolB法进行RNA的一步提取。 2)用无水乙醇(CsCl法）或异丙醇(其他方法）沉淀RNA,离心获得RNA沉淀。 3)用75%的乙醇清洗RNA沉淀以除去多余的盐分。 4)晾干，尽量吸去乙醇，并确保RNA中没有多余的乙醇存在。 5)用保存的100%甲酰胺重悬RNA。甲酰胺的用量应视RNA沉淀的多少而定，通常用量在10ul到1000ul之间。 6)大部分的RNA可立即溶解，可以在室温放置15min，并用吸头不时的上下吹打液体，以促进RNA的溶解。如果RNA的浓度很高，可以在4℃放置过夜，以促进其完全溶解。 7)定量时，将1ulRNA溶液稀释到500ul水中，测量其OD260值 8)如果样品被过分稀释了，可以像水溶的RNA样品一样进行乙醇沉淀浓缩，加水溶解后使用。 注意事项 | 1)当使用CsCl法进行RNA的提取时，更应注意RNA多余盐分的去除。 2)“操作方法”第4)步中，RNA不要过分干燥。 3)测量RNA的OD值时，应在空内对照中加入1ul甲酰胺，以消除RNA产物中由于甲酰胺的加入而带来的可能的背景，
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