货号：	PC3201
数量：	大量
供应商：	上海超研生物科技有限公司
保质期：	1年
规格：	200次

小鼠尾巴基因组DNA提取扩增试剂盒
 
保存条件:
Tail A 和 Tail B 室温（15–25℃）干燥条件下可保存 12 个月； 2× Taq MasterMix -20℃可长期保存，多次冻融不会影响活性，如需经常使用,可存放于 4℃。

产品介绍:
本试剂盒采用独特的缓冲体系，试剂盒包含了快速制备基因组 DNA 和 PCR 扩增的所有试剂，适用于从小鼠尾巴一步法提取基因组 DNA 并用于 PCR 扩增。整个提取过程无需有机溶剂抽提，简便、快捷，而且质量稳定可靠。具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等特点。此试剂盒用于快速提取鼠尾 DNA。提取的DNA 仅适用于 PCR 反应，不能用于酶切。

注意事项:
1.裂解缓冲液应放置于室温保存，如放在低温（-20℃或4℃）保存时有沉淀析出，可在56℃水浴中重新溶
解沉淀，并摇匀溶液后使用。
2.样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA 片段较小且提取量也下降。

适用范围:
适用于从鼠尾组织中一步法提取基因组DNA并用于PCR扩增，适用于大量快速的基因检测和筛查。

操作步骤:
1.取材：用剪刀或刀片切取0.5cm长度的鼠尾置于0.2ml的PCR管中，往每管中加入100ul Tail A溶液.。（如实验室中有加热块装置（heat block）可以将鼠尾置于1.5ml离心管中进行相同操作）； 注意：鼠尾的长度和最后溶解DNA的溶液量是实验的关键，应视具体条件而定，最好做预实验来确定这两个变量。
2.用200ul吸头将鼠尾捣几下。激烈程度最好使尾部皮肤和尾骨分离，皮肤破碎。（如果处理的是幼鼠尾巴，可以预先剪掉200ul吸头前部0.2-0.3cm，用这种变成宽口吸头可以很容易将鼠尾破碎）； 
 

1. 置于PCR仪（或加热块装置）上98度保持10分钟以裂解细胞； 
   4.用200ul吸头轻轻吹吸几下，并将100ul裂解物转移到1.5ml离心管中，加入100ul Tail B溶液，混匀，此时可立刻看见白色沉淀出现； 
   5.12000离心5分钟，除掉沉淀物；
   6.小心吸取150ul左右的上清转移到另一个干净的1.5ml离心管中； 
   7.补加500ul的冷乙醇（乙醇冻存于-20度至少2小时），颠倒混匀，置于室温5分钟； 
   8.12000离心10分钟，弃上清；
   9.加入1ml 70%乙醇，12000离心1分钟，弃上清，（如果处理大量样本，倒掉上清后立刻将管口倒扣在干净的吸水纸上，吸水纸可最大程度的将下流的乙醇吸干，同时乙醇会慢慢挥发，一般这种干燥方法需要30-60分钟）； 
   10.12000离心30秒，用干净吸头吸掉生育的乙醇，注意别吸掉沉淀物；
   11.打开管口，室温放置10分钟，使乙醇完全挥发干净； 
   12.加入50ul TE缓冲液或无菌水，溶解DNA； 
   13.PCR扩增，一般取2-5ul用于PCR反应；
   
   实验流程:
   
   
   反应举例:
   2x Taq MasterMix
   模板DNA
   正向引物（10mM）

反向引物（10mM）
灭菌水

PCR反应循环的设置:
94℃ 3min；94℃ 30sec，55℃ 30sec，72℃ 1min 30 循环；72℃ 5min；

结果检测:
反应结束后取5μl 反应产物，琼脂糖凝胶电泳检测。
注意：举例仅供参考，实际反应条件因模板、引物等的结构不同而各异，需根据实际情况设定最佳反应条件。