mRNA 信使RNA（英语：messengerRNA，缩写：mRNA），是由DNA经由转录而来，带著相应的遗传讯息，为下一步转译成蛋白质提供所需的讯息。可用来研究基因表达调控。

PCR 聚合酶链式反应（英文：Polymerasechainreaction，缩写PCR），是一种分子生物学技术，用于扩增特定的DNA 。在基因文库构建中，可以从微量起始DNA样本中得到测序所需大量DNA产物。

TruSeqRNA文库制备试剂盒v2

英文名称：TruSeqRNALibraryPreparationKitv2

中文名称：TruSeqRNA文库制备试剂盒v2

IlluminaTruSeqRNA文库制备试剂盒v2可以从总RNA生成mRNA的测序文库，用于后续的簇生成和DNA测序。

Illumina测序流程：

文库构建

簇生成（illumina测序平台特配试剂）

上机测序

TruSeqRNALibraryPreparationKitv2 借助增强的多重分析功能和提供预混试剂的简单工作流程，可从总RNA生成专注于mRNA的测序文库。

TruSeqRNA文库制备试剂盒v2提供24个唯一的标签，具备更强的多重分析性能，可处理大量样本（例如，可在HiSeq2500系统单次运行中处理多达384个RNA-Seq样本）。

与之前的方法相比，预先混合试剂消除了多数移液步骤并减少了纯化量，同时最大限度地缩短了手动操作时间。如此，可通过NGS平台提供的最易用样本制备工作流程实现经济实惠的高通量RNA测序研究。

• SimpleWorkflowforRNAandDNA:流程简化

Master-mixedreagentsandminimalhands-onsteps.

•ScalableandCost-EffectiveSolution:方案精简

Optimizedformulationsandplate-basedprocessingenableslarge-scalestudiesatalowercost.

•EnhancedMultiplexPerformance:高通量多路运行

Twenty-fouradaptor-embeddedindexesenablehighthroughputprocessingandgreaterapplicationflexibility.

•High-ThroughputGeneExpressionStudies:高通量基因表达研究

Gel-free,automation-friendlyRNAlibrarypreparationforrapidexpressionprofiling.

——TruSeqRNALibraryPreparationKitv2 参数

——TruseqRNA文库构建原理

dT磁珠抓取含polyA尾的mRNA，从总RNA中提取mRNA。

逆转录技术合成CDNA。

PCR法扩增DNA产物。

——TruSeqRNALibraryPreparationKitv2组份和保存

BoxA:保存-15°to-25°C

BoxB:保存-15°to-25°C

BoxA和BoxB主要作用：cDNA末端修复。

注：根据需要选择BoxA或BoxB。BoxA和BoxB的区别是RNA接头Index 不同。

Box1:保存2°to8°C，主要成分：RNA纯化磁珠。

Box2:保存-15°to-25°C主要成分：磁珠清洗，cDNA模板合成。

PCRPrepBox:保存-15°to-25°C。主要作用：PCR法富集产物。

——TruSeqRNA文库制备试剂盒v2 加样量要求

TruSeqRNASamplePreparationv2protocolsareoptimizedfor0.1–1µgoftotalRNA.LoweramountsofRNAmightresultininefficientligationandlowyield.

优化加样量：总RNA 0.1-1µg

RNA量低于0.1µg可能会影响连接效率导致产量低。

YoucanalsousepreviouslyisolatedmRNAasstartingmaterial.UsetheentirefractionofmRNApurifiedfrom0.1–1µgoftotalRNA.

也可以预先从总RNA分离得到mRNA作为起始样本。从0.1-1µg总RNA分离的所有mRNA都要用于加样。

——Illumina®TruSeq®RNASamplePreparationKitv2制备流程

ThisprotocolexplainshowtoconvertthemRNAintotalRNAintoalibraryoftemplatemoleculessuitableforsubsequentclustergenerationandDNA sequencingusingthereagentsprovidedintheIllumina®TruSeq®RNASamplePreparationKitv2.

Thefirststepintheworkflowinvolvespurifyingthepoly-A containingmRNAmoleculesusingoligo-dTattachedmagneticbeads.Followingpurification,themRNAisfragmentedintosmallpiecesusingdivalentcationsunderelevatedtemperature.ThecleavedRNAfragmentsarecopiedintofirststrandcDNAusingreversetranscriptaseandrandomprimers.SecondstrandcDNAsynthesisfollows,usingDNAPolymeraseIandRNase H.

ThecDNAfragmentsthengothroughanendrepairprocess,theadditionofasingle‘A’base,andthenligationoftheadapters.TheproductsarethenpurifiedandenrichedwithPCRtocreatethefinalcDNAlibrary.

流程概述：使用Illumina®TruSeq®RNASamplePreparationKitv2试剂将总RNA的mRNA转化为模板文库，以用于后续的DNA测序。

1. 纯化：通过oligo-dT磁珠法纯化得到poly-AmRNA分子。

2. mRNA切段：高温，二价阳离子。

3. mRNA段子转为第一条cDNA：逆转录酶，随机引物。

4. 第二条cDNA合成：DNA聚合酶I，RNase H。

5. cDNA 段子末端修复：添加A碱基，连接接头。

6. 产物纯化，PCR富集，得到cDNA文库。

TruSeq®RNASamplePreparationKitv2文库制备方法分为低样品量和高样品量两种。

——TruSeq®RNASamplePreparationKitv2特点

Multiplexingcapabilitywith12indexingadaptersforatotalof24adaptersAbilitytoprocessupto384samplesperrunonaHiSeq2000

OptimizedfillvolumesAutomationsupportStreamlinedworkflow:

Master-mixedreagentsreducereagentcontainersandpipetting

UniversaladapterforpreparationofmRNAsamples

Highthroughput:

EnablessimultaneouspreparationofmultiplexedmRNAsamples

Volumesareoptimizedforstandard96-wellplate

Troubleshootingwithbuilt-inprocesscontrolchecks

Universalindexadaptertagsforallsamples.Additionaladaptersandprimersarenotnecessary.

——TruSeqRNA和DNA文库制备相关产品

RNA文库制备

TruSeqRNALibraryPreparationKitv2,SetA

(12indexes,48samples)RS-122-2001

TruSeqRNALibraryPreparationKitv2,SetB

(12indexes,48samples)RS-122-2002

DNA文库制备

TruSeqDNALibraryPreparationKitv2,SetA

(12indexes,48samples)FC-121-2001

TruSeqDNALibraryPreparationKitv2,SetB

(12indexes,48samples)FC-121-2002

ForClusterGenerationoncBotandSequencingontheHiSeq 2000/1000andHiScanSQ

TruSeqPaired-EndClusterKitv3—cBot—HS

(1flowcell)PE-401-3001

TruSeqSingle-ReadClusterKitv3—cBot—HS

(1flowcell)GD-401-3001

ForClusterGenerationoncBotandSequencingontheGenomeAnalyzerIIx

TruSeqPaired-EndClusterKitv2—cBot—GA

(1flowcell)PE-300-2001

TruSeqSingle-ReadClusterKitv2—cBot—GA

(1flowcell)GD-300-2001

ForClusterGenerationontheClusterStationandSequencingontheGenomeAnalyzerIIx

TruSeqPaired-EndClusterKitv5—CS—GA

(1flowcell)PE-203-5001

TruSeqSingle-ReadClusterKitv5—CS—GA

(1flowcell)GD-203-5001

mRNA测序简介

mRNA测序(mRNA-Seq)已迅速成为分析疾病状况、生物过程及广泛研究设计中的转录组的首选方法。mRNA-Seq不仅可提供极为准确且高灵敏度的量化基因表达，还可识别已知的和新的转录异构体、基因融合和其他特征及等位基因特异性表达。mRNA-Seq可提供编码转录组的完整视图，而并不受限于先验知识。

mRNA测序的优势

与基因表达芯片相比，mRNA-Seq在分析转录组方面具有诸多优势：

该方法适用于更广泛的动态范围，不仅可增加灵敏度，还可提高基因表达中测量的倍数变化的准确性。

可捕获已知特征和新发特征

可广泛应用于众多物种

用于癌症研究的mRNA-Seq

 癌症会积累大量的基因变化，但通常只有少数发展为肿瘤。借助mRNA-Seq监控基因表达变化有助于识别疾病预后或治疗反应的预测性生物标志物。mRNA-Seq还支持对基因表达和病因进行特征分析，并可了解影响肿瘤分类和发展的变异。

用于复杂疾病研究的基因表达图谱

 基因表达图谱和调控研究可让您形象地了解基因组、表观遗传和环境因素对常见疾病的影响程度。mRNA-Seq是一种成熟高效的探查和图谱分析工具，可提供具有较高影响力的研究结果，并识别针对一系列复杂疾病的下游调查的目标靶点，其中包括神经系统、免疫系统、新陈代谢以及心血管方面的疾病。

TruSeqRNA文库制备试剂盒v2及更多illuminaNGS测序产品欢迎您咨询华雅再生医学旗舰公司：红荣微再（上海）生物工程技术有限公司 021-64091883手机号：15001904520。红荣微再-客服QQ: 2395557778 经销商专员QQ：735551118

红荣微再以“传递科学价值，服务科学研究”为宗旨，主营干细胞、精准医疗、细胞治疗、器官再生四大板块的产品