转染试剂

如何选择合适的培养基

病毒包装离不开细胞转染,而细胞转染成功很大程度上取决于细胞状态的好坏,细胞状态的好坏又由什么决定呢,除去一些不可抗性因素,最重要的应该就是给它们提供营养物质的培养基了吧。因此,培养基对于病毒包装很重要,选择合适的培养基对于病毒包装成功有着至关重要的作用。这里,我们就简单介绍一下几种常见的培养基以供大家实验中参考:经典的培养基有很多种,InvitrogenGibco),ThermoFisher(HyClone),Sigma等公司都可以提供。其中DMEM、RPMI1640、MEM、DMEM/F12都是应用最广泛的培养基。其他如M199、IMDM、L15培养基等也用于某些细胞的培养。

MEM是由Eagle‘s基础培养基(BME)发展而来的,其中增加了组分的范围及浓度。

Dulbecco改良的BEM(DMEM)培养基是为小鼠成纤维细胞设计的,现在常用于贴壁细胞的培养。DMEM的氨基酸浓度是MEM的两倍,维生素浓度是MEM的4倍,采用双倍的HCO3-和CO2浓度起到更好的缓冲作用,最初的配方中葡萄糖含量为1000mg/L,后来为了某些细胞的生长需要,将葡萄糖含量又调整为4500mg/L,这就是大家常说的低糖和高糖了。aMEM含有附加的氨基酸,维生素以及核苷和脂肪酸,它可广泛应用于各种细胞类型,包括对营养成分要求苛刻的细胞。

Ham’sF12是为在低血清浓度下克隆CHO细胞而设计的,现在也广泛应用于克隆形成率的分析及原代培养,F12还可以与DMEM等体积混合使用,得到一种高浓度与成分多样化相结合的产物。这种培养基已应用于许多原代培养及更难养的细胞系的培养。但如果你是着手建立一种全新细胞的培养体系,根本找不到任何参考,那你就得花点时间自己试验了。万事开头难嘛。因为没有一个标准答案。在MEM中培养的细胞,很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之,首选MEM做贴壁细胞培养,RPMI1640做悬浮细胞培养会是一个好的开始。你也可以购买几种培养基来,然后花大约两周的时间做一种。

RPMI1640培养基是专为淋巴细胞培养而设计的,现在已广泛应用于悬浮细胞的培养。以前经常听到有人问,这种细胞该用哪一种培养基呢?其实这个问题的答案可以很简单,也可以好复杂。此话怎讲,如果这种细胞是购自ATCC或其他的细胞库,那很简单,问供应商就行了。或者找到相关的文献,作为参考。Invitrogen网站上有一个CellLineDatabase的工具,也很好用。选择你感兴趣的细胞类型,它就会弹出推荐的培养基,血清和转染试剂等,有时还有优化好的转染步骤,很方便。Sigma网站上也有一个MediaExpert,包括了培养基所有成分的功能描述,使用推介和参考文献等;它还是一个解决问题能手,对于细胞培养中的常见问题,如细胞贴壁不好、培养基变色等,它都会列出可能的原因,并提供补救办法。这个Expert果然不简单!

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