2021-08-21【求助】CRISPR/Cas9 基因敲除动物模型怎么做？

no1lbt 想问问论坛里面的大神们，CRISPR/Cas9 基因敲除这种实验技术好开展么？我们想通过该技术替换细胞一基因CDS去的碱基，来比较突变型和野生型蛋白表达和功能的差异，通过CRISPR/Cas9这技术是否能够实验可行，有没有具体的protocol可分享？多谢！现在运用CRISPR/Cas9技术做点突变的好像还挺多的，我这边还能找到一些资料，如果你需要的话，可以留个邮箱给我，我发给你！

cas9技术做定点突变，这个可以做的，很成熟了。

CRISPR/Cas9技术做完全性基因敲除，包括移码突变、大片段基因敲除、双基因甚至多基因敲除都非常成熟了。大致流程可参考：http://www.cyagen.com/cn/zh-cn/service/crispr-cas9-knockout.html?from=160也可以用CRISPR/Cas9技术做基因敲入，Cas9基因敲入鼠包括：点突变、小片段基因敲入。Cas9基因敲入鼠是利用Cas9基因敲入技术，针对靶基因设计、构建相应的gRNA质粒和donorvector，通过Cas9核酸酶的切割作用和同源臂的同源重组，引入特定的突变或外源基因。比如在目的基因上引入点突变(模拟人类遗传疾病模型)；或将报告基因(如EGFP，mRFP，mCherry，mYFP，或LacZ等)，从而可以通过报告基因来跟踪目标基因的表达；也可以用报告基因取代大小鼠本身的基因，使KO/KI同时发生。现在专门提供转基因、基因敲除小鼠定制的商业机构技术非常成熟，找商业机构定制远比自己在实验室重头研究技术，琢磨各种实验条件，更快，性价比更高。

我也在做

jchlss我也在做能请教一下么？我完全没做过，想学习一下！

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怎么说到关键时候就没了呢…………………………

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