CRISPR基因敲除

Crispr基因敲除细胞系构建主要实验项目服务

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Crispr基因敲除细胞系构建主要实验项目服务
序号服务项目具体描述单价(元)实验周期备注
2Crispr引物设计每个基因设计2-3对引物3004天包含引物设计、合成费用
3gRNA质粒构建一对引物退火,用T4连接酶将其连接到gRNA载体中9001周包含载体酶切、引物退火、T4连接、转化涂板
4gRNA质粒提取从菌液中提取gRNA质粒,测序12003天包含菌液接种、质粒提取,测序验证,无内毒素质粒提取
5细胞培养目的细胞的培养,以备细胞转染等操作4001周包含细胞培养、传代及冻存
6慢病毒包装与感染在HEK293T细胞中将构建好的cas9-gRNA表达质粒包装成慢病毒后感染目的细胞30002周包含慢病毒包装效率的优化
7抗性筛选利用抗性筛选转染阳性的细胞38001-2周包含抗性使用浓度和时间的优化
8测序检测敲除效率细胞基因组提取,PCR出靶序列,测序检测13001周包含基因组提取,目的基因PCR和测序
9分单克隆细胞将抗性筛选后得到的细胞利用有限稀释法分到96孔板中,获得单克隆细胞14002天包含细胞消化、细胞计数、96孔板分单克隆
10单克隆细胞培养传代培养96孔板中的细胞,挑选由单个细胞长成的细胞群落传代扩增50003-5周包含单克隆细胞挑选、细胞传代扩增
11基因敲除细胞株鉴定WB检测单克隆细胞中目的基因的剩余表达量16001-2周包含20个单克隆细胞株样品制备,WB检测目的基因和内参
12基因敲除细胞系冻存扩增并冻存基因敲除细胞系10001周包含细胞扩增及冻存
总计(元)
 199006-8周/
说明:Crispr敲除实验有一定的风险,我们会先做项目分析,比较有把握才会开展后续实验,一般会选取2-3个靶点来做,抗性筛选完后确定效率最高的来筛选单克隆细胞株