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抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色

mayitao /发布时间:1627234204 /浏览量:190

货号：	M071
供应商：	上海歌凡生物科技有限公司
数量：	大量
保存条件：	4℃
规格：	≥100T

抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色
货号：M071
原理:
TRAP染色反应抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)为破骨细胞的特异性标志酶，应用偶氮偶联组化分析法酶活性部位显示红色反应。以萘酚二磷酸盐为底物，偶氮副品红为显色剂，TRAP在酒石酸钾钠存在条件下将萘酚AS-BI磷酸盐水解为萘酚AS-BI，与显色剂结合形成红色沉淀。

组织固定:

80%酒精固定；福尔马林或者4%多聚甲醛固定时间16小时到4天，4℃下进行。也可以用切片前不固定，用2.5%戊二醛二次固定10分钟。

试剂盒组成:

产品编号	产品名称	包装
M071A	磷酸盐缓冲液	50ml
M071B	亚硝酸盐溶液	20ml
M071C	副品红溶液	20ml
M071D	萘酚AS-BI磷酸盐	1ml
M071E	苏木素	50ml
M071F	酒石酸钾钠	5g

操作步骤

石蜡切片4～5um,脱蜡至水洗；细胞爬片或者冰冻切片用80%酒精或戊二醛固定后蒸馏水水洗3次，每次3分钟。
配制六偶氮副品红溶液（亚硝酸钠溶液和副品红溶液等比例混合，即为六偶氮副品红，现配现用）
配制孵育液：取1ml六偶氮副品红加到18ml醋酸盐溶中，再加入1ml萘酚AS-BI磷酸盐溶液，再加酒石酸钾钠282mg。调pH值5.0，过滤备用；
阴性对照孵育液：取1ml六偶氮副品红加到18ml醋酸盐溶中，再加酒石酸钾钠282mg。调pH值5.0，过滤备用
切片入37℃蒸馏水水洗30秒；
入孵育液37℃孵育50-60分钟；
去离子水水洗3分钟；
入苏木素复染40秒；
自来水水洗10分钟返蓝；
甘油明胶封片。

结果分析:

体会与说明:

骨组织切片易脱片，操作过程中水洗要轻；
骨组织脱钙宜用柠檬酸脱钙或者EDTA脱钙，禁用强酸脱钙；
切片以3-4um为宜，切片过厚就会有酶扩散现象；
孵育液要新鲜配制，现用现配；pH值对染色影响比较大，pH值5.0为最佳；
37℃孵育时要防止水分蒸发，染色液干凅。

温馨提示：不可用于临床治疗。

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