2*标识制品中附带dNTP混合物。

产品组分

P1011

TaqDNA聚合酶 5U/μl            100μl

10×PCRBuffer（Mg²⁺Plus）  1.25ml

6×LoADIngBuffer                         1ml

P1012

TaqDNA聚合酶 5U/μl        100μl

10×PCRBuffer（Mg²⁺Plus）    1.25ml

dNTPs（各2.5mM）         1ml

6×LoadingBuffer            1ml

 P1013

TaqDNA聚合酶 5U/μl             200μl

10×PCRBuffer（Mg²⁺Plus）   1.25ml×2

6×LoadingBuffer            1ml×2

P1014

TaqDNA聚合酶 5U/μl              200μl

10×PCRBuffer（Mg²⁺Plus）  1.25ml×2

dNTPs（各2.5mM）         1ml×2

6×LoadingBuffer            1ml

P1015

TaqDNA聚合酶 5U/μl          100μl×24

10×PCRBuffer（Mg²⁺Plus） 1.4ml×24

注：1 TaqDNA聚合酶分为2.5U/μl与5U/μl两种包装，可自由选择，如没特别说明提供5U/μl的包装。

       2 10×PCRBuffer分为Mg²⁺Plus与Mg²⁺Free两种包装，可方便选择。如没特别说明提供10×PCRBuffer（Mg²⁺Plus）。Mg²⁺Free的 10×PCRBuffer提供25mMMgCl₂。

保存条件

-20℃保存2年。多次冻融不影响生物学活性。

产品说明

 TaqDNA聚合酶是嗜热性细菌Thermusaquaticus来源的热稳定重组型TaqDNA聚合酶，分子量为94KD。扩增片段的长度可达5kb（简单模板）。延伸速度为

0.9~1.2kb/min（70~75℃）。该酶具有5’→3’聚合酶活性，无3’→5’外切酶活性。扩增产物具有3-dA。

产品特点

热稳定性好：95℃下半衰期超过40min。

PCR产物具有3’-dA，可直接用于T/A克隆。

产品用途

常规PCR扩增

DNA标记

DNA测序

制备TA克隆用PCR产物

活性定义

   一个活性单位（U）指用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在72℃、30min内，摄入10nmol全核苷酸所需的酶量。

质量控制

   相关测试表明无外源内切酶或外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶污染；PCR方法检测无宿主残余DNA，能有效扩增人基因组中的单拷贝基因；室温放置一周，

扩增活性无明显改变。

10×PCRBuffer

 500mMKCl

 100mMTris-Cl

 15mMMgCl₂

 1%Triton-100

酶贮存液

 20mMTris-HCl

 1mMDTT

 0.1mMEDTA

 100mMKCl

 50%Glycerol

 1%Triton-100

应用举例

注：以下反应举例为50μl标准PCR体系，仅供参考。实际PCR条件应根据模板、引物结构、目的片段大小加以优化，确定最佳反应条件。

以λDNA为模板，扩增1kb片段。

λDNA（2.5ng/μl）　　　　　　　　   1μl　　　　　  

引物1（10μM）　　　　　　　  　  2μl

引物2（10μM）　　　　　　　　　  2μl

10×PCR Buffer 　　　　　　               5μl

dNTPs（2.5mM）          　  　           4μl

Taq（5U/μl）  　　　　　              0.25μl

超纯水      　　　　　　　      补足至50μl

PCR反应条件

95℃        3min

95℃         30sec

55~68℃    30sec   30Cycles

72℃         1min

72℃         10min

注意事项

1 TaqDNA聚合酶具有脱氧核苷酸转移酶活性，因此在PCR产物3’末端通常会加上1个多余的腺嘌呤。

2  碱基出错率是指在每个碱基合成过程中所掺入的错误核苷酸数目。TaqDNA聚合酶的碱基错误率为1×10^-5。

3  建议在冰上配置PCR反应液后，再放入PCR仪中进行扩增。这有利于提高扩增的特异性，减少非特异性扩增，得到良好的PCR结果。

4 模板DNA推荐用量（50μl标准PCR体系）

   人类基因组DNA      0.1μg---1μg

   λDNA                0.5ng---5ng

   质粒DNA            0.1ng-10ng

   大肠杆菌DNA        10ng-100ng

5 如进行PCR扩增后，除目的条带外，还伴随其他杂带，建议适当减少体系中的Taq酶用量，以增加PCR扩增反应的特异性。

Q&A

问：东盛TaqDNA聚合酶与国外品牌的TaqDNA聚合酶有什么区别？

答：东盛TaqDNA聚合酶的活性比较稳定，其品质与国外知名公司的产品差异不大。但因酶活性的复杂性，批间产品可能会有差异。在PCR实验过程中，如PCR

扩增产物变淡或无，可适当增加酶的用量；如发现有较强的非特异性扩增，那可减少酶的用量。

问：不同批次的TaqDNA聚合酶的活性有没有差异？

答：有一定的差异。为解决这一问题，东盛已经通过TaqDNA聚合酶的规模化生产，减少生产批次，实现产品品质的均一性。

问：如何利用TaqDNA聚合酶进行加A反应？

答：由高保真DNA聚合酶（如Pfu）产生的PCR扩增片段的纯化产物1-7μl；

   加入1μlTaqDNA聚合酶10×反应缓冲液（含MgCl₂）；

   加入dATP至终浓度0.2mM；

   加入5U的TaqDNA聚合酶；

   加超纯水至终反应体积为10μl；

   70℃孵育15-30分钟；

   进行TA克隆。