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我现在在纯化天然蛋白时第一步层析使用的是苯基的疏水层析柱，样品和缓冲液的硫酸铵浓度为0.5M，PH在5.6左右，发现蛋白能结合到柱子上，但是在洗脱时采用梯度洗脱洗不下来，最后用水洗也洗不下来，后来我用少量的0.15M的氢氧化钠洗出一高峰，请问，这是因为我的蛋白结合的太牢吗？该怎样解决呢？
再就是疏水层析和PH值有这么大的关系吗？
谢谢！
再就是疏水层析和PH值有这么大的关系吗？
谢谢！
相关回复
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回复：时间：2010-06-09
对，你这个是因为蛋白和pheny结合太牢固，从你的情况看，水都洗不下来，除非添加有机溶剂才能洗下来（如乙醇等），但这样往往会影响蛋白的活性。所以phenyl填料可以基本不要试了，你可以选用比phenyl疏水更弱的填料，如ether，PPG可以试试。
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已帮助 0人
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回复：时间：2010-06-07
对，你这个是因为蛋白和pheny结合太牢固，从你的情况看，水都洗不下来，除非添加有机溶剂才能洗下来（如乙醇等），但这样往往会影响蛋白的活性。所以phenyl填料可以基本不要试了，你可以选用比phenyl疏水更弱的填料，如ether，PPG可以试试。
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回复：时间：2010-06-04
对，你这个是因为蛋白和pheny结合太牢固，从你的情况看，水都洗不下来，除非添加有机溶剂才能洗下来（如乙醇等），但这样往往会影响蛋白的活性。所以phenyl填料可以基本不要试了，你可以选用比phenyl疏水更弱的填料，如ether，PPG可以试试。
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