一、材料

1.缓冲液和溶剂

乙醇，NaCl（1mol/L，用TE(pH8.0)配制），乙酸钠（3mol/L，pH5.2)，TE(pH8.0)。

2.酶和缓冲液

无DNase的胰RNase

3.核酸和寡核苷酸

DNA样品，CsCl密度梯度离心纯化

4.离心机和转子

BeckmanSW50.1转子或可适用相应离心管的替代转子，SorvsllSS-34转子或性能相同的替代转子

二、方法

1.测定质粒制备物体积。加入0.1倍体积的3moI/L乙酸钠（pH5.2)和2倍体积的乙醇，混匀后于4℃放置30min。

2.于4℃用大于10000g(转速大于9100r/min时用SorvallSS-34转子）离心15min,回收核酸沉淀，尽可能去掉上清液，然后打开管口，在工作台上放置几分钟，使最后残留的微量乙醇蒸发殆尽。

3.用0.5~1mlTE(pH8.0）溶解潮湿的DNA沉淀。

质粒DNA浓度应不少于100μg/ml。

4.加无DNase的RNase至终浓度为10μg/ml，室温温育1h。

5.准备一个BeckmanSW50.1离心管（或相当的离心管）加入4ml含1mol/LNaCl的TE(pH8.0)，用带有一次性吸头的自动移液器在1mol/LNaCl溶液上部加铺一层1ml经RNA酶处理过的质粒DNA样品。必要时，可酌情用TE(pH8.0)充满离心管。

6.于20℃用大于150000g（转速大于40000r/min时，用BeckmanSW50.1转子）离心6h,小心去掉上清液。

质粒DNA沉淀在管底，而寡核苷酸和小片段DNA留在上清中。

7.用0.5mlTE(pH8.0）重新溶解质粒DNA沉淀，加50μl3mol/L乙酸钠（pH5.2),将DNA溶液转移到微量离心管中。

8.加2倍体积的乙醇，于4℃放置10min,沉淀DNA。然后于4℃以大于10000g离心15min,尽量去尽上清液，打开管口，放置在工作台上放置几分钟，让最后残留的痕量乙醇蒸发殆尽。

9.用TE(pH8.0)溶解潮湿的质粒DNA沉淀。