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地高辛配基随机标记DNA探针
mayitao
/发布时间:1632331802 /浏览量:205
1．标记DNA探针每次标准的反应可标记10ng至3线性的DNA，也可标记更大量的DNA，但所有的成分和体积要相应增加。
（1）DNA探针热变性，煮沸10min，迅速冷却于冰/乙醇中5min以上，待用。
（2）取Eppendorf管（1.5ml）置于冰上，加下列及试剂：
新鲜变性的DNA1-3
六聚核苷酸混合物2（管5）
dNTP标记用混合底物2（管6）
加无菌重蒸水至19
DNA聚合酶Ⅰ大片段（Klenow）1（管7）
（3）在37℃保温至少60min，可到20h。
（4）煮沸5min，终止反应。
（5）15000rpm离心30s，置于冰上待用。
2．预杂交按100cm2膜用20～40ml预杂交溶液，预杂交时使溶液处于流动状态。
预杂交液组成：5㗓SC
0.5%（W/V）封阻试剂（管11）
0.1%（W/V）N-十二烷酰肌氨酸钠
0.02%（W/V）SDS
膜放入塑料袋，灌入预杂交液，排除气体后密封，在65℃预杂交过夜。
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