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2021-08-09【求助】GAPDH做内参，请问有做出条带的条件（抗体浓度），多谢

cola9897
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一直没做出来这个，目的条带倒是可以做出条带
请问有做GAPDH为内参的吗？一抗二抗的浓度时多少？最好是santacruz的抗体。多谢！
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相关回复

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回复：时间：2021-08-14

我做这个，santa的抗体，中杉分装的，一抗1：1000，二抗1：5000（中杉进口分装）

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回复：时间：2021-08-11

我用碧云天的一抗，1：500稀释，发出来很好，就是回收的抗体不好用，好像也是某种进口抗体被他们分装的

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回复：时间：2021-08-10

以GAPDH为内参的我做出来了，但目的蛋白的我没做出来。GAPDH为内参：一抗用的碧云天分装的抗体，浓度1：5000，二抗用的中杉的，浓度1：500.请问：我的组织放在-70度冰箱半年了，提的蛋白做WB，内参能做出来，是不是说明蛋白没问题？可是目的蛋白怎么一条带都没有了？希望高手给与指点。

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回复：时间：2021-08-14

常遇到的情况是GADPH做的出来,目的条带出不来的.个人也遇到过这样的情况,而且也是你说的那个公司,做了三次,次次如此,后来找别人要了一个其他公司的GADPH,一次成功.你找别人要点其他内参抗体来试试吧.Santa的抗体也算不上什么好抗体了,质量并不稳定.

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回复：时间：2021-08-10

我用GAPDH（康成的，1：1000做的，可回收用两三次），和ANTI-HA单抗（Roche，1：1000）混合一起做，效果还是很好的，没有互相干扰的现象发生。

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回复：时间：2021-08-13

以GAPDH为内参的我做出来了，但目的蛋白的我没做出来。GAPDH为内参：一抗用的碧云天分装的抗体，浓度1：5000，二抗用的中杉的，浓度1：500.请问：我的组织放在-70度冰箱半年了，提的蛋白做WB，内参能做出来，是不是说明蛋白没问题？可是目的蛋白怎么一条带都没有了？希望高手给与指点。

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回复：时间：2021-08-20

santa的一抗，浓度为1：400，二抗我用的是1：2000

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