同型对照抗体

2021-07-20用流式检测血小板活化标志物CD62p 遇到棘手问题 很头疼

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我按照以下步骤操作:测定P选择素1、静脉血枸橼酸钠抗凝2管各5l,一管+IgG1PE5L+CD41APC5L另一管+CD62PE5l+CD41APC5l放暗室处20min,+0.5mlPBS流式检验可是测得结果非常低(比如同型对照是0.8,测定管就只有0.9左右)注:用的是冠心病患者的血标本并...
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回复:时间:2017-11-05

博凌科为解答:你的阴性对照的比率是多少?是0吗,然后你的同型对照是0.8,而样品是0.9?如果是这样的话,很明显你用的抗体太多了,导致非特异性结合非常强,所以你的同型对照的背景色也会有0.8。另外,你的样品中的细胞数呢?做流式要求细胞1-2个M, 细胞数过多或者是过少都会影响染色的效果。我不知道你用的抗体是哪个公司的,一般而言,我们在染色的时候,样品(也就是1-2M细胞,悬浮在100uL的PBS中)加入1uL抗体来进行染色。而你的样品似乎只有5uL,居然还是使用5uL的抗体。在这样的体系中,染色肯定不会好的,