2017-11-04一般用作elisa的多克隆抗体需要纯化吗

需要 制备抗体都需要进行纯化处理

经过PAGE电泳分离的蛋白样本可以在凝胶里直接固定和染色（比如考马斯亮蓝）看结果，但如果要检测蛋白质特异性就要借助传统WesternBlot的转膜的步骤，然后在膜上进行免疫反应检测。仿佛是天经地义似的。可是你有没有想过为什么一定要转膜？很简单：因为凝胶上的蛋白质会发生扩散迁移，需要“固定”，但是“固定”本身会影响蛋白质和抗体的免疫识别反应，所以需要将经过PAGE电泳分开的样本从电泳胶上共同转移到稳定的固相支持介质――膜上，使之不能再迁移同时又能保持免疫原性，然后在这个PAGE胶的“影像”也就是印迹上，可以通过免疫检测目标蛋白的特异性。这个方法借助转膜克服了一些难题，但是转膜本身也带来另一些问题：比如转膜的不完全性――样本中各种蛋白的大小和荷电各不相同，在电场中离开PAGE胶迁移速度、与膜的结合能力各有差异，导致转膜效率潜在差别；比如PAGE胶孔径和膜的孔径甚至电流的大小都会影响转膜效率――非常偶然遇上转移效率低的蛋白比如Fibrinogen纤维蛋白原，简直气昏人。再加上转膜过程也有可能造成部分蛋白免疫原性的丢失――特别是非变性胶，目标蛋白的部分抗原表位可能会发生变化，导致抗体无法识别检测。再加上转膜后膜上的其他空白位点需要进行封闭，以及膜本身对部分检测方法的不兼容和背景问题，可见费精力又费钱的转膜这个PAGE的“印迹”有时未必能很好的代表PAGE胶结果本身。展开