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免疫酶标技术一PAP法（过氧化物酶抗过氧化物酶抗体复合物法）

蚂蚁淘 /发布时间:1629912604 /浏览量:328

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实验方法原理	PAP的基本原量是在间接法的基础上，即在加完酶标二抗以后，再加一个PAP复合物（过氧化物酶一抗过氧化物酶抗体复合物）。PAP复合物为由3个酶分子和2个抗酶抗体亚单位构成的复环形复合物，其稳定性很强，冲洗时不会脱落。在这种方法中，PAP复合物中的抗酶抗体与特异性一抗必须来自同一种属动物。其优点是比间接法更为灵敏，而且背景染色体。
实验材料	抗体
试剂、试剂盒	PBSH2O2血清DAB苏木精
仪器、耗材	显微镜
实验步骤	1. 标本固定后，PBS洗涤； 2. 1%H₂O₂（或1%H₂O₂甲醇）阻断内源性过氧化物，室温10～20分钟； 3. PBS洗2×3分钟； 4. 正常血清（二抗的正常血清）孵育，室温20分钟； 5. 滴加一抗，室温1小时或4℃过夜； 6. PBS洗3×3分钟； 7. 滴加二抗，室温30分钟； 8. PBS洗3×3分钟； 9. 加PAP复合物，室温60分钟； 10. PBS洗涤3×3分钟； 11. 0.04%DAB+0.03%H₂O₂显色5～10分钟； 12. 充分水洗； 13. 苏木精复染，封片观察。