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酶与抗体的偶联实验一基本方案

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实验材料	抗体
试剂、试剂盒	磷酸钠HRPO碳酸盐缓冲液过碘酸钠SASTrisEDTABSA甘油
仪器、耗材	透析膜离心机
实验步骤	1. 浓度≥1mg/ml抗体溶液对2l0.1mol/lpH6.8的磷酸钠缓冲液透析，于4℃缓慢摇动下过夜。 2. 10mgHRPO溶解于1ml0.1mol/lpH9.2的碳酸盐缓冲液，取0.25ml加入0.25ml新配制的NaIO₄溶液中，盖紧混匀，于室温下避光放置2h。 3. 取透析后的抗体溶液1ml。加至得自步骤2的全部混合液中，置入装有玻璃棉的巴斯德吸管中，将管尖用Parafilm封口膜封好。加0.25gSephadexG-25室温下避光放置3h。 4. 柱子用0.75ml碳酸盐缓冲液流洗，以洗脱偶联物。加38μl新配制的NaBH₄溶液至洗脱物中，室温于避光放置30min。 5. 加112μl新配制的NaBH₄溶液避光放置60min，加0.9ml饱和硫酸铵（SAS）。溶液于4℃下温和振摇30min。 6. 于4℃，10000g离心15min，弃上清。沉淀重悬于0.75mlTEN缓冲液中，装入透析袋中于4℃下对2lTEN缓冲液透析过夜。换TEN缓冲液再继续透析4h。 7. 从透析袋中取出偶联物，加BSA至20mg/ml。加等体积甘油，于-20℃保存。