双荧光素酶（DualLuciferase）报告基因检测试剂盒

产品简介：

报告基因检测是现代分子生物学研究领域中分析结构基因旁侧区域潜在的顺式元件(如启动子、增强子和沉默子等)和反式作用因子相互作用关系的一种重要工具。吉满生物生产的双荧光素酶报告基因检测试剂盒(DualLuciferaseReporterGeneAassyKit)，是一种结合萤火虫和海肾荧光素酶检测的先进辅助报告基因技术。

虽然萤火虫和海肾荧光素酶都具有生物发光报告基因的检测特点，但它们却具有完全不同的进化起源，因而它们的酶结构和底物要求完全不同。我们利用这一特点，将它们配合起来使用，即可形成十分有效的双荧光素酶报告基因系统，其中RenillaLuciferase通常作为内对照。它的实验原理是先通过萤火虫荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶。荧光素酶在Mg²⁺和O₂参与下催化荧光素氧化成oxyluciferin,在荧光素的氧化过程中，发出生物荧光(bioluminomescence)。然后在后续实验中加入抑制萤火虫荧光素酶催化荧光素发光的物质，来终止萤火虫荧光素的生物荧光，同时加入海肾荧光素酶(RenillaLuciferase)的底物coelenterazine。通过荧光素酶的催化氧化成coelenteramide发出生物荧光。然后通过化学发光仪或液闪测定仪测定生物荧光。

产品特点：

●简便，快捷。

●灵敏度高，可检测10^-20mol的萤火虫荧光素酶和3×10^-19mol的海肾荧光素酶。

●安全，非***性。

●酶的浓度线性范围可达7个数量级。

●准确性高：使用海肾荧光素酶作为对照可以大大降低细胞数量，生长状态和转染效率等对实验结果的影响。

注：LuciferaseAssayReagent避光保存，不能反复冻融。

保存条件：

未拆封试剂盒-20℃避光保存，有效期为6个月；-70℃避光保存，有效期为一年。

实验步骤：

1.       细胞裂解：

(1).将转入报告基因的细胞中的培养基移除，加PBS轻轻洗涤。按如下方案加入CellLysisBuffer，将培养板放在微型振荡器上室温振荡15min，充分裂解细胞。

  注：裂解产物可室温保存6小时，4℃保存16小时，-70℃可长期存放。（裂解产物不能多次反复冻融）

 (2).将充分裂解后的裂解产物，10,000-15,000rpm离心3-5min。去离心后的上清液移入新的EP管进行后续检测。

2. RenillaLuciferaseAssay工作液的配置：

按照样品要求的量，将RenillaLuciferaseAssayReagent(100×)按照稀释比例加入RenillaLuciferaseAssaybuffer，混匀后室温放置。

3. 荧光素酶检测：

(1).按照仪器说明书要求将荧光检测打开，设定参数测定时间为10s，测定间隔为2s。

  (2).将样品按照20～100μl的体积加入测量管中（保持样品的加样量一致），另外加入100μlLuciferaseAssayReagent混匀2-3次（不能漩涡混匀），充分混匀后测定RLU（Relativelightunit），同时设置CellLysisbuffer为空白对照孔。

  (3).将检测后的样品，加入100μl配制的RenillaLuciferaseAssay工作液混匀2-3次，充分混匀后测定RLU，同时设置RenillaLuciferaseAssay工作液为空白对照孔。

(4).将(2)检测的RLU值与(3)检测出的RLU值进行比较，通过得出的比值来确定报告基因的激活程度。

注意事项：

1.       温度会对酶的活性会产生影响，因此所有试剂应放置室温后再使用，但海肾荧光素酶底物应置于冰浴。

2.       RenillaLuciferaseAssay工作液需现配先用，不能反复冻融。

3.       萤火虫荧光素酶催化的生物发光的最强发光波长为560nm，海肾荧光素酶催化的生物发光的最强发光波长为465nm。

产品价格：