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我刚开始用piece公司的超敏发光剂,开始是一个师兄建议我按照0.5mla+0.5mlb+9ml水,平皿中孵育5分钟,我这样做了,无荧光,压片20分钟也无任何条带。于是不稀释,直接1:1混合后加到膜上,立即就有荧光条带,即使压上片子,也可以看到,我估计荧光至少持续了8分钟。应为我压第3张片子的时候还有荧光。我的上样量为160,80,40,20(做内参).因为师姐说看到荧光应该30秒就有很浓的条带,可我连续压了1分钟,3分钟,均无任何条带和被经,后来我压了8分钟,有条带,估计是压片的过程中反复解开压片盒,造成片子移动,但可以看出来条带是可以的。同一天,同学用了我的发光剂,因为有经验在先,虽然看到条带,仍压片10分钟,条带浓密,无背景。
有荧光为何还需要压片这么久呢?不知各位用的时候有无这种情况!
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