2008-01-10【专题讨论】用过pierce 公司超敏发光剂的请进！

我刚开始用piece公司的超敏发光剂，开始是一个师兄建议我按照0.5ml a + 0.5ml b + 9ml水，平皿中孵育5分钟，我这样做了，无荧光，压片20分钟也无任何条带。于是不稀释，直接1：1混合后加到膜上，立即就有荧光条带，即使压上片子，也可以看到，我估计荧光至少持续了8分钟。应为我压第3张片子的时候还有荧光。我的上样量为160，80，40，20（做内参）.因为师姐说看到荧光应该30秒就有很浓的条带，可我连续压了1分钟，3分钟，均无任何条带和被经，后来我压了8分钟，有条带，估计是压片的过程中反复解开压片盒，造成片子移动，但可以看出来条带是可以的。同一天，同学用了我的发光剂，因为有经验在先，虽然看到条带，仍压片10分钟，条带浓密，无背景。有荧光为何还需要压片这么久呢？不知各位用的时候有无这种情况！

我认为可能是你的显影液有问题了。因为只要在其他的东西没有问题的情况下，肉眼直接可见的荧光应该是压5-10s即可显影出来的。只要看见荧光，出条带和那一种发光试剂就没有关系了，主要是后续的步骤。（而且你用的westPico吧，那个其实算不上超敏发光剂，经不起稀释，而且发光也不算很持久，不过对于常规的western实验应该是很经济的一种方式了吧，毕竟性价比较高呢！）建议你重新配制显影液后再显影，因为显影液的寿命比较短，一般来说工作液2-3周就应该更换以保持最佳的显影效果，浓缩液保存期在室温也一般不超过半年。很多实验室都存在显影液“超期服役”的现象，因此显影效果不佳也是必然的。

完全同意lee800265的观点。我也认为是显影液的问题。不管什么牌子的ECL，只要看到了荧光，如果压片出不来或者要压很久，那肯定是胶片或者显影定影液的问题了。而且，你a+b直接上膜而不稀释，等于是用10X的ECL了，还是浪费的很。所以建议你看下Pierce的说明书，到底是应该稀释多少倍的。

因为用的是自动洗片机，所以显影液和定影液的质量问题我根本不知道。但估计显影液至少是十天以前配的。对于自动洗片机，显影液和定影液怎么处理呢？至于胶片，我菜刚开始做，以前师姐买来的，大半年没用了。他们以前曝光的情况，应该还过的去。