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细胞融合实验一聚乙二醇法
蚂蚁淘
/发布时间:1533849384 /浏览量:165
| 实验方法原理 | 细胞融合的诱导物种类很多．常用的主要有灭活的仙台病毒(Sendaivirus)，聚乙二醇(Polyethyleneglycol，PEG)和电脉冲。目前应用最广泛的是聚乙二醇，因为它易得、简便，且融合效果稳定。PEG的促融机制尚不完全清楚，它可能引起细胞膜中磷脂的酰键及极性基团发生结构重排。 | ||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 实验材料 | 鸡红细胞 试剂、试剂盒 | PEGHanks液 仪器、耗材 | 显微镜离心机水浴箱离心管试管载玻璃片盖玻片
实验步骤 | 1. 取新鲜鸡血以0.85%生理盐水制成10%的悬液。 2. 称取0.5克PEG（MW=4000）放入试管内，在酒精灯上融化之，迅速加入0.5ml预热的Hanks液混匀制成50%的PEG溶液。放入37℃水浴中待用。 3. 取上述10%的鸡红细胞悬液1ml放入离心管中，再加入5mlHanks液混匀，然后以1000rpm离心5分钟，小心弃去上清，用指弹法将细胞团块弹散。 4. 取上述50%PEG溶液0.5ml，在1分钟内滴加到鸡红细胞悬液，边加边轻轻摇动混匀。待PEG全部加入后静置1分钟左右。此全部过程都要求在37℃水浴内进行。 5. 缓慢滴加9mlHanks液以终止PEG的作用，在37℃水浴内静置5分钟。 6. 离心弃上清后，取一滴融合后的细胞悬液滴片，加盖片镜检。 7. 结果观察：在高倍镜下可以看到有两个或两个以上的鸡红细胞膜融合在一起，形成一个异核体细胞。要注意辨别融合细胞与重叠的鸡红细胞。 8. 融合率的计算：在高倍镜下随机计数200个细胞（包括融合的与未融合的细胞），以融合细胞（含两个或两个以上的细胞核的细胞）的细胞核数除以总细胞核数（包括融合与未融合的细胞核）即得出融合率。公式如下： 
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