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流式细胞计量术（基于荧光的蛋白质分析）实验一活细胞表面抗原的荧光染色（间接免疫荧光）

蚂蚁淘 /发布时间:1631381404 /浏览量:546

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实验材料	细胞
试剂、试剂盒	PBS溶液叠氮化钠
实验步骤	1.在培养皿中加入1mmol/LEDTA/1mmol/LEGTA的PBS溶液，收获细胞。此程序比通常的胰蛋白酶消化时间长。4℃1000g离心5分钟。操作始终在冰上进行。 2.用4mlPBS+0.1%叠氮化钠和1%BSA或热的灭活血清洗细胞。 3.计数细胞，每个样品的最小浓度为1X10⁶/ml。 4.将样品等分为50μl小体积的含0.1%叠氮化钠和1%热的灭活血清的PBS溶液。 5.加合适滴度的初始抗体，用系列稀释确定合适滴度范围。 6.在冰上孵育细胞30分钟。 7.每个样品中加入4mlPBS+叠氮化钠和BSA，轻轻混合。 8.1000g离心细胞5分钟。 9.用4mlPBS+叠氮化钠和BSA洗样品。 10.1000g离心细胞5分钟。 11.在适当体积的PBS+叠氮化钠中重悬细胞。 12.加合适滴度的次级抗体，用与起始滴度相近的范围确定所需量。 13.在冰上孵育细胞30分钟。 14.每个样品中加入4mlPBS+叠氮化钠和BSA，轻轻混合。 15.1000g离心细胞5分钟。 16.在相近体积的PBS+叠氮化钠和BSA中重悬细胞，终浓度为1X10⁶~5X10⁶/ml。