2021-07-31关于电泳缓冲液，奇怪又好笑的问题

好在这样子做下去有的时候能出条带，有的时候不能（当然也不排除其他原因）。但总是感觉不放心，各位有什么好的建议吗？感谢。

我是做荧光二抗孵育后Odessy扫膜，不是做ECL，不知道有没有做过这方面的，想求教其他相关问题。

是这样的啊，电流是会越来越低的，因为电泳过程溶液中离子发生变化了

chenaoke是这样的啊，电流是会越来越低的，因为电泳过程溶液中离子发生变化了那意思是不用管？

你跑的是恒压，电流变化是正常的，还有就是电泳时不用加冰块降温，转膜时才需要降温。

展开引用灬丨牛牛丨灬chenaoke是这样的啊，电流是会越来越低的，因为电泳过程溶液中离子发生变化了那意思是不用管？......不用管，别重复多次使用就行

01晓红帽你跑的是恒压，电流变化是正常的，还有就是电泳时不用加冰块降温，转膜时才需要降温。嗯，好的，谢谢。

展开引用chenaoke灬丨牛牛丨灬chenaoke是这样的啊，电流是会越来越低的，因为电泳过程溶液中离子发生变化了那意思是不用管？不用管，别重复多次使用就行......嗯。好的，谢谢。

温度变化之后，电流会有变化的，红外扫描比ECL简便，真实。

漏液有时也会造成电流下降

肯定是漏液了。重新装一下。

BIOLOGy-boy肯定是漏液了。重新装一下。看样子我这个机子漏液严重啊，每次电泳的时候电流都会不断变化。

mxgleva112漏液有时也会造成电流下降我试试看。谢谢你

tyh031905119温度变化之后，电流会有变化的，红外扫描比ECL简便，真实。请教一个问题：如果有两个分子量相近的目的蛋白，能不能贴一块膜？如果能的话，两个蛋白孵一抗和二抗的顺序是什么呢？如果两个目的蛋白的二抗种属不同的话，又当如何呢？谢谢~~~

展开引用灬丨牛牛丨灬tyh031905119温度变化之后，电流会有变化的，红外扫描比ECL简便，真实。请教一个问题：如果有两个分子量相近的目的蛋白，能不能贴一块膜？如果能的话，两个蛋白孵一抗和二抗的顺序是什么呢？如果两个目的蛋白的二抗种属不同的话，又当如何呢？谢谢~~~......不建议放在一起，会相互干扰。非要这么做的话我觉得可以考虑“敷育A抗体_曝光_不膜再生，敷育B抗体_曝光时同时用两个波长”

展开引用tyh031905119灬丨牛牛丨灬tyh031905119温度变化之后，电流会有变化的，红外扫描比ECL简便，真实。请教一个问题：如果有两个分子量相近的目的蛋白，能不能贴一块膜？如果能的话，两个蛋白孵一抗和二抗的顺序是什么呢？如果两个目的蛋白的二抗种属不同的话，又当如何呢？谢谢~~~不建议放在一起，会相互干扰。非要这么做的话我觉得可以考虑“敷育A抗体_曝光_不膜再生，敷育B抗体_曝光时同时用两个波长”......你用的是NC膜还是PVDF膜呢？NC膜的话请问怎么让它活化完全呢（具体方法是怎么样的呢）？再次感谢。

展开引用灬丨牛牛丨灬tyh031905119灬丨牛牛丨灬tyh031905119温度变化之后，电流会有变化的，红外扫描比ECL简便，真实。请教一个问题：如果有两个分子量相近的目的蛋白，能不能贴一块膜？如果能的话，两个蛋白孵一抗和二抗的顺序是什么呢？如果两个目的蛋白的二抗种属不同的话，又当如何呢？谢谢~~~不建议放在一起，会相互干扰。非要这么做的话我觉得可以考虑“敷育A抗体_曝光_不膜再生，敷育B抗体_曝光时同时用两个波长”你用的是NC膜还是PVDF膜呢？NC膜的话请问怎么让它活化完全呢（具体方法是怎么样的呢）？再次感谢。......没用过NC膜，NC膜不用活化吧？

恒压电流不就是这样么？

展开引用tyh031905119灬丨牛牛丨灬tyh031905119灬丨牛牛丨灬tyh031905119温度变化之后，电流会有变化的，红外扫描比ECL简便，真实。请教一个问题：如果有两个分子量相近的目的蛋白，能不能贴一块膜？如果能的话，两个蛋白孵一抗和二抗的顺序是什么呢？如果两个目的蛋白的二抗种属不同的话，又当如何呢？谢谢~~~不建议放在一起，会相互干扰。非要这么做的话我觉得可以考虑“敷育A抗体_曝光_不膜再生，敷育B抗体_曝光时同时用两个波长”你用的是NC膜还是PVDF膜呢？NC膜的话请问怎么让它活化完全呢（具体方法是怎么样的呢）？再次感谢。没用过NC膜，NC膜不用活化吧？......不活化能用嘛？

kmyind恒压电流不就是这样么？转膜的时候你是恒压还是恒流。哪一个更好点？

一直做的是恒压，没有做过恒流，恒流难道是过程中不断调整电压？囧，这个过程还真没有深究过

kmyind一直做的是恒压，没有做过恒流，恒流难道是过程中不断调整电压？囧，这个过程还真没有深究过转膜的时候还真有人做恒流的。

同上，恒压电泳电流就是这么变得啊……电流只要不过高就没什么问题

很正常，而且跑到分离胶的时候应该还会进一步降低吧？选择恒压跑的话，我的经验是电流在16mA之上都是OK的，再低的话就有问题了

这种buffer为什么不自己配呢

dong3504269很正常，而且跑到分离胶的时候应该还会进一步降低吧？选择恒压跑的话，我的经验是电流在16mA之上都是OK的，再低的话就有问题了嗯，确实如你所说，那么还有一个问题要请教：转膜的时候您是恒压还是恒流呢？请教您的条件~有没有68KD39KD25KD大小分子量的经验？谢谢~~

展开引用灬丨牛牛丨灬kmyind一直做的是恒压，没有做过恒流，恒流难道是过程中不断调整电压？囧，这个过程还真没有深究过转膜的时候还真有人做恒流的。......我这边做转膜就是恒流，并不需要一直电压的，其实和恒压跑PAGE胶是一样的。我们所谓的恒压电泳，是设定电压，默认电流限定值大于电泳槽可能用到的电流值，所以电压不变，电流会随着离子，温度等环境变化（电阻有没变就不知道了，我不是学物理的）。而恒流转膜的时候，我们是让电压限定值大于可能用到的电压值，然后设定电流，转膜的过程中电压也会略微浮动，刚开始转的时候电压会比较低，慢慢涨到差不多就不怎么跳动了

展开引用灬丨牛牛丨灬dong3504269很正常，而且跑到分离胶的时候应该还会进一步降低吧？选择恒压跑的话，我的经验是电流在16mA之上都是OK的，再低的话就有问题了嗯，确实如你所说，那么还有一个问题要请教：转膜的时候您是恒压还是恒流呢？请教您的条件~有没有68KD39KD25KD大小分子量的经验？谢谢~~......嗯…这几个分子量相近的我都做过，我的方案是湿转，恒流，0.2A，2h。你可以试一下