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2017-07-22western上样缓冲液加入后再变形改不改变目标蛋白浓度

山楂冰糖大白梨
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实验小白刚刚起步，一般采用等质量上样的方法，但我算的上样量是没加缓冲液之前的，加完缓冲液蛋白样品浓度会变么？师姐说不会变，就按照算好的上样量加就行。

前几天提的样按50ug算每个样本的上样量也只有上5ul左右，按师姐说的就那么上了，结果发完光只有内参有条带，目标蛋白一点也没有，但以前做过一次是出过一点趋势的，而且这次整个过程感觉做的很仔细，发完光结果也很干净整齐，所以我在想是不是跟上样量有关系？上样缓冲液加入之后会使样本浓度稀释五倍么，这样的话上样量就得乘5。

变性前后加上样缓冲液的区别是什么呢？哪一种会改变蛋白浓度从而改变上样量呢？


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相关回复

已帮助 0人

回复：时间：2017-07-28

一般上样量都是按质量算，不考虑浓度。变性需要加入含变性剂的上样缓冲液处理才算变性。

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回复：时间：2017-07-23

落寞的光影一般上样量都是按质量算，不考虑浓度。变性需要加入含变性剂的上样缓冲液处理才算变性。我算的上样量是加缓冲液之前的，加了之后样本蛋白质量没变但是整个液体体系的体积增多了，是否相当于稀释了样本蛋白，最终的上样量会随之改变吗？

有用（0）

已帮助 0人

回复：时间：2017-07-25

你测的浓度是不加上样缓冲液的，加了上样缓冲液浓度肯定稀释了，总体积等于未加前的体积加上1/4体积末加前的体积就好了，太绕口了。

有用（0）
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