loADIngbuffer的中文名字叫上样缓冲液,6*的缓冲液中可以显示两条带，前面的紫兰色的条带是溴酚蓝，在0.6%、1%、1.4%和2%琼脂糖凝胶电泳中，溴酚兰的迁移率分别与1Kb、0.6Kb、0.2Kb和0.15Kb的双链线性DNA片段大致相同；后面的兰色条带是二甲苯青，它在1%和1.4%琼脂糖中电泳时，其迁移速率分别与2Kb和1.6Kb的双链线性DNA大致相似。而对于PAGE胶他们的迁移速率也分别不同。

• 中文名

• 上样缓冲液

• 外文名

• loadingbuffer

• 配制量

• 5mL

• 配制方法

• 5×SDS-PAGELoadingBuffer

1. 1主要用途

2. 2制备方法

loadingbuffer的功能主要有两个。第一，里边的指示剂溴酚蓝和二甲苯氰FF起到指示的作用，显示电泳的进程，以便我们适时终止电泳；第二，里边的成分甘油可以加大样品密度，使样品密度大于TAE，从而沉降到点样孔中，防止样品飘出点样孔。另外，有的Buffer是加有SDS的，一般都会写明。SDS主要是促使聚合酶变性，因为没有除尽的聚合酶会结合在DNA双链上影响它的迁移速率。细胞裂解后的裂解液，加loading100℃加热，也是为了中止酶促反应，防止提取的蛋白质降解。

6×loadingbuffer一般配置：

6×Loadingbuffer:

30mMEDTA

36%(v/v)Glycerol

0.05%(w/v)XyleneCyanolFF

0.05%(w/v)BromophenolBlue

主要用于DNA电泳

10×Loadingbuffer:

30mMEDTA

50%(v/v)Glycerol

0.25%(w/v)XyleneCyanolFF

0.25%(w/v)BromophenolBlue

主要用于RNA电泳

10Xloadingbuffer中仅有色素溴酚蓝（BromophenolBlue)一种染料（浓度0.05%）；

6Xloadingbuffer中含色素溴酚蓝（BromophenolBlue)、二甲苯腈蓝FF（XyleneCyanolFF)两种染料（浓度都是0.05%）

在琼脂糖凝胶（0.5%~1.4%）中溴酚蓝（BromophenolBlue）约与300bp的双链线状DNA的迁移速度相同，二甲苯腈蓝FF则与4kbp的双链线状DNA的迁移速度相等。

6Xloadingbuffer是用来上样的；10Xloadingbuffer是stopbuffer，是停止酶促反应的，如果一定要用10Xloadingbuffer的上样当然也可以，唯一要注意的是：10Xloadingbuffer中多了一样SDS，它会使酶类如taq酶变性，以PCR产物为例，在电泳泳道上会产生一片弥散，如果电泳跑的距离短，和多出来一条带没有什么区别（大概1000bp左右）。

5×SDS-PAGELoadingBuffer配制方法

组份浓度：

250mMTris-HCl（pH6.8）

10%（W/V）SDS

0.5%（W/V）BPB

50%（V/V）甘油

5%（W/V）β-巯基乙醇

配制量：5mL

配制方法：

1.量取下列试剂，置于10mL塑料离心管中。

1MTris-HCl　1.25mL

SDS　0.5g

BPB　25mg

甘油　2.5mL

2.加入去离子水溶解后定容至5mL。

3.小份（500μl/份）分装后，于室温保存。

4.使用前将25μl的2-ME加到每小份中。

5.加入2-ME的LoadingBuffer可在室温下保存一个月左右

• ，，，