2005-06-25【求助】转化毕赤酵母的方法，没有电转仪啊！

俺们都是用电转仪的，没有你就比较麻烦了。还有个方法是原生质体融合，不过你还是买电转仪把，分子生物学的东西一般是很耗钱的。你不肯花钱就不能做实验，这是肯定的。由于酵母有结构复杂的细胞壁，所以最早用于酵母载体DNA转化的方法是原生质体法。Ito等(1983)将酵母细胞进行各种离子溶液的处理，然后进行DNA转化，发现一价碱性阳离子Cs+、Li+能明显地增加外源DNA的吸入，首次实现了完整酵母细胞的DNA转化。粒子轰击也能用于酵母细胞的转化以上实验都没有做过，你可以想办法试试！

实验室是没有的东西买了一大堆，可移动超静工作台，就是个玻璃的大球，5000美金买了两个，灭菌锅，一大一小，一个4000多，一个8000多美金pH计都1300美金两个，水浴锅2700美金两个，旋转蒸发仪14000美金两个！！该有的却没有！制冰机，荧光分光光度计，电转仪！！！

俺们都是用电转仪的，没有你就比较麻烦了。还有个方法是原生质体融合，不过你还是买电转仪把，分子生物学的东西一般是很耗钱的。你不肯花钱就不能做实验，这是肯定的。由于酵母有结构复杂的细胞壁，所以最早用于酵母载体DNA转化的方法是原生质体法。Ito等(1983)将酵母细胞进行各种离子溶液的处理，然后进行DNA转化，发现一价碱性阳离子Cs+、Li+能明显地增加外源DNA的吸入，首次实现了完整酵母细胞的DNA转化。粒子轰击也能用于酵母细胞的转化以上实验都没有做过，你可以想办法试试！

我做的是酿酒酵母转化，不知对你有没有帮助，我们采用的是醋酸锂转化法，转化效率还可以，而且醋酸锂试剂容易买到，具体方法可以看精编分子生物学实验指南，2001，科学出版社，page:509

而且我们也做过电转化，在外面作的，结果没有成功，他们做的到是赤壁酵母。

还是用电转化吧！我做过，不是电转的。由于酵母细胞有细胞壁，所以用通常的转化几乎是不可能的。现在常用的方法有4中：氯化锂法，醋酸锂法，原生质体法，电转化法。其中转化效率最高的是电转化法，当然你转化的目的也是为了得到有多个基因整合的酵母菌，这其中也是电转化法得到的几率最高。再就是原生质体法了，也不错，就是麻烦一点，还有破酵母细胞壁的酶，中文名是酶解酶，有点贵，北京的一个公司有代理，具体我不记得了。最后，还是建议你用电转化吧。