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我们同学b-actin用175mA转半小时，结果很好，但不是用的Bio-Rad转膜仪，我昨天用的180mA转1h，立春红染色条带很清楚，但ECL曝光后什么条带也没有！我看到帖子上有的转20KD以下的蛋白都用到300mA1h,是不是我转膜的时间不够？今天又做了一次，一会转膜，请高手们提提建议。
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回复：时间：2021-08-07
谢谢笨木木！我用的是Bio-Rad湿法转移，转移缓冲液是重复了一次的，180mA转1h，比第一次转的时候电压要低（可能是重复利用的原因），结果我把转膜后的胶考染了一下，发现没有转移完全，胶上还有很多很多条带，只是颜色浅了一些，立春红染膜条带能看清楚，但不是很亮，我现在正用二抗孵育，不知结果如何。我同学用175mA半小时就好，仪器不同会差别这么大吗？？？
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回复：时间：2021-08-07
笨木木b-actin分子量是42KD,如果你用的是Bio-Rad半干转膜仪，可以用恒压20V，25-30min就可以了，很快，效果也很好。今天用20V转了30min，考染转过的胶发现条带还很清楚！立春红染膜也有条带，不是很清晰。不知你们做的时候是不是这样？今天第一次用Bio-rad半干转膜仪，用20V的时候发现电流只有50mA,是不是不正常？
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