WB 转膜条件推荐相关交流-蚂蚁淘在线

Western免疫印迹（WesternBlot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。

为利于更好的实验效果，不同蛋白，转膜条件略有不同，迪申生物技术（上海）有限公司专注于生产免疫组化相关产品多年，对WB实验有一定了解，今天跟各位同学一起分享下实验过程中发现的不同蛋白的转膜条件。

蛋白来源：RAW264.7总蛋白

蛋白名称：一些转录因子

蛋白分子量：40~70KD

WB用膜类型、孔径：0.45NC

转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒流400mA

转膜时间：60~90min

PS.其实吧，以我的经验来看，除非目的蛋白特别小，或者特别大，不然转膜时间真的不是那么重要，曾经因为失误，转了15min就拆下来了，但从丽春红染色来看，跟平常实验也没有太大的区别。

蛋白来源：内皮细胞总蛋白

蛋白名称：occludin&AKT

蛋白分子量：65KD&56KD

WB用膜类型、孔径：0.45PVDF

转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒压100V

转膜时间：60~70min

设备名字是「Bio-Radmini」。

蛋白来源：肿瘤手术标本

蛋白名称：转录因子

蛋白分子量：33KDa

WB用膜类型、孔径：PVDF膜

转膜方式（恒压、恒流）：350mA恒流

转膜时间：150min

转膜设备：湿转Bio-Rad

说明：相同条件曾用于数个30-70KDa的蛋白，都能成功转上，不过没有试缩短时间效果如何；实验时没为转膜条件苦恼，倒是电泳时胶的浓度及时间根据不同分子量而有区别。

蛋白来源：成纤维细胞

蛋白名称：smad3

蛋白分子量：54KDa

WB用膜类型、孔径：PVDF膜

转膜方式（恒压、恒流）：350mA恒流

转膜时间：150min

转膜设备：湿转Bio-Rad

蛋白来源：肿瘤细胞

蛋白名称：磷酸化蛋白

蛋白分子量：10-200KDa

WB用膜类型、孔径：MilliporePVDF膜0.45um

转膜方式（恒压、恒流）：120v恒压

转膜时间：120min

转膜设备：湿转Bio-Rad

建议：转膜缓冲液只用2次，基本都转上，5%BSA封闭，减少背景。

蛋白来源：Hepg2

蛋白名称：EGFR

蛋白分子量：170kd

WB用膜类型、孔径：pvdf0.45

转膜方式（恒压、恒流）：24V

转膜时间：2个半小时

转膜设备：伯乐半干转

蛋白来源：肝癌细胞

蛋白名称：HIF-1α

蛋白分子量：120kD

WB用膜类型、孔径：NC膜

转膜方式（恒压）：80伏，湿转

转膜时间：150分钟

设备：「Bio-Radmini」

建议：湿转，转膜液特别重要，否则会导致电压或者电流不稳影响转膜条带。转膜均现配先用，不重复利用。转膜时间一般是150分钟，80伏恒压。经李春红染色，靠近蛋白胶的一侧膜上蛋白染色深，膜另外一面染色浅，说明蛋白未转过。该湿转条件自己做过的蛋白分子量范围：170-36kD。

蛋白来源：肺脏

蛋白名称：ICAM-1

蛋白分子量：85~110KD

WB用膜类型、孔径：0.22NC

转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒流300mA

转膜时间：120min

设备名字Bio-Radmini

一抗用的santacruz1mL包装的。比例调整到1：800做出很好的条带。效价会一直降低的。去年做的这个指标，今年夏天做就不行了。

蛋白来源：人肿瘤细胞

蛋白名称：磷酸化蛋白

蛋白分子量：30-60KDa

WB用膜类型、孔径：pallNC膜0.45um

转膜方式（恒压、恒流）：恒流0.85-1mA/平方厘米膜

转膜时间：60-90min

转膜设备:北京六一半干转

建议：转膜缓冲液用新鲜配制的，可先配成2倍的母液，转膜液的多少会影响电转的效率，一般将吸水纸润湿即可，不要和膜一起浸泡，这样效果很好。

蛋白来源：人肝癌肿瘤细胞

蛋白名称：notch

蛋白分子量：60-120KDa

WB用膜类型、孔径：pallNC膜0.45um

转膜方式（恒压、恒流）：恒流0.3A

转膜时间：-20度冰柜120min

转膜设备:湿转Bio-Rad

建议：转膜缓冲液用新鲜配制的，可先配成10倍或5倍的母液，保持低温是转膜效果的一个保证，这样效果很好。

蛋白来源：肺脏、肝脏等。

蛋白名称：actin

蛋白分子量：43kD

WB用膜类型、孔径：NC膜PALL0.22um

转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒流200mA

转膜时间：45~60min

设备名字Bio-Radmini

用的santacruz分装和整装的都可以。效价一般1：1000-1：3000左右，可稳定较长一段时间。

蛋白来源：细菌蛋白

蛋白名称：全部的可溶性蛋白

蛋白分子量：11-170KD

WB用膜类型、孔径：0.45NC

转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒流300mA

转膜时间：80min

蛋白来源：骨肉瘤CELLLINE

蛋白名称：Betaactin

蛋白分子量：42kDa

WB用膜类型、孔径：NitrocelluloseMembrane0.2umPoreSize(Invitrogen)

转膜方式（恒压、恒流）：湿转，恒压22v

转膜时间：90min

转膜设备：X-cellSureLockMini-cell(Invitrogen)

建议改进方向：转膜过程冰水浴，保持低温，TransferBuffer重复使用。

蛋白来源：肾瘤细胞

蛋白分子量：39kDa

WB用膜类型、孔径：NitrocelluloseMembrane0.2umPoreSize(Invitrogen)

转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒压100v

转膜时间：50min

蛋白来源：pichia分泌表达

蛋白名称：细胞因子等

蛋白分子量：17到30kDa

WB用膜类型、孔径：milliporePVDF0.45um

转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒压：100V

转膜时间：60min

这个条件除了100KDa的预染maker转的不好，剩下的条带都非常清晰。正向前面ycwzq说的，感觉时间不是很重要，只要蛋白别太小或太大，在一个比较宽的时间和电压范围都能转上。当然这些还有一个重要的影响因素就是所用的蛋白转印缓冲液。

蛋白来源：小鼠前列腺癌细胞

蛋白名称：P53P21RAD51GAPDH

蛋白分子量：53KDa、21KDa、37KDa、36KDa

WB用膜类型、孔径：PVDF膜0.45

转膜方式（恒压、恒流）：恒压110v

转膜时间：60min

转膜设备:湿转Bio-Radmini

蛋白来源：来自MDCK增殖的流感病毒裂解物

蛋白名称：PB1

蛋白分子量：96kd（注意，10%SDS-PAGE，冰上电泳。用预染Marker观察100kd的条带跑到胶的正中间位置时，才开始转膜，否则转膜效率降低）

WB用膜类型、孔径：NC膜，0.45

转膜方式（恒压、恒流）：恒压，100V

转膜时间：2hours

转膜设备:BIO-rad转膜设备。其间，准备一个冰盒，将电泳槽半埋到冰里。

转膜液的配制：（如甲醇的比例和是否加SDS以及多大质量浓度等）：2.9g甘氨酸，5.8gtris，0.37gSDS，200ml甲醇。

蛋白来源：软骨细胞

蛋白名称：b-actin

蛋白分子量：43kd

WB用膜类型、孔径：PVDF膜，0.45

转膜方式（恒压、恒流）：湿转，恒流，350mA

转膜时间：85min

转膜设备:BIO-rad转膜设备。其间，准备一个冰盒，将电泳槽半埋到冰里。

转膜液的配制：（2.92g甘氨酸，5.8gtris，0.375gSDS，200ml甲醇，用双蒸水定容到1L）

蛋白来源：HepG2细胞

蛋白名称：Akt及P-Akt

蛋白分子量：55KDa/56KD

WB用膜类型、孔径：PVDF膜0.45孔径

转膜方式（恒压、恒流）：100V恒压

转膜时间：75min

转膜设备:湿转Bio-Rad

蛋白来源：大鼠

蛋白名称：Bactin（42KDa）

WB用膜类型、孔径：PVDF（0.45）膜

转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒流150mA

转膜时间：100min

转膜设备:北京六一

蛋白来源：大鼠大脑皮质

蛋白名称：b-actin

蛋白分子量：43kd

WB用膜类型、孔径：PVDF膜，0.45

转膜方式（恒压、恒流）：半干转，恒流，2mA/cm2

转膜时间：8-55min

转膜设备:BIO-rad转膜设备。

转膜液的配制：（2.92g甘氨酸，5.8gtris，0.375gSDS，200ml甲醇，用双蒸水定容到1L）

编辑：wch吴春晖

免责声明：本文仅代表作者个人观点，与本网无关。其创作性以及文中陈述文字和内容未经本站证实，对本文以及其中全部或者部分内容、文字的真实性、完整性、及时性本站不做任何保证或承诺，请读者仅作参考，并请自行核实相关内容